NCPP抗腫瘤作用機理及其對免疫性肝損傷的保護作用

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1、山東大學碩士學位論文中文摘要第一部分樹突狀細胞在NCPP抗腫瘤中的作用目的短小棒狀桿菌(CP)制劑是一種非特異性免疫增強劑。大量臨床資料顯示，CP制劑在治療癌性胸水、局部注射治療黑色素瘤、抗病毒、細菌感染以及在治療免疫功能低下性疾病方面已取得令人興奮的進展，但副作用較大限制了其迸一步的l盜床應用．若能利用先進技術制備出療效好、副作用低、應用范圍廣的新型制劑，必將有著重要的應用價值。無細胞短棒狀桿菌制劑(Non-cellCorynebacteriumPatvumProduct，NCPP)是利用納米技術制備出的一種新型免疫調(diào)節(jié)劑。樹突狀細胞(dendriticce

2、ll，DC)是豈今為止人們所發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)功能最強的抗原提呈細胞，同時也是可以在體內(nèi)外直接激活機體初始和特異性免疫應答的唯一細胞。研究表明，DC可以有效地攝取腫瘤抗原，加工處理成抗原肽，然后遞呈給效應性T淋巴細胞，發(fā)揮特異性的抗腫瘤作用。我們在前期工作中已經(jīng)證明了NCPP可以激活機體的巨噬細胞(Macrophage，M由)，發(fā)揮抗腫瘤作用。如果NCPP亦能夠激活機體的DC，那么這將對NCPP抗腫瘤免疫的深入研究起著重要的作用。因此，本論文旨在研究荷瘤小鼠骨髓來源樹突狀細胞(bonemarrow-derivedDCs，BMDCs)在NCPP抗腫瘤中的作用，對NCPP

3、抗腫瘤免疫機制進行了深入探討。方法1．NCPP抗腫瘤活性及脾激活作用的檢測將B16黑色素瘤細胞懸液接種于C5713I．／6鼠。待聹瘤長至5mmxSmm，將小鼠隨機分為B1繃CPP組、B16／cP組、B16，PBS組及PBS組。治療組腹腔注射NCPP或CP鼠；對照組注射PBS，同時開始測量腫瘤大小，紀錄各組小鼠的生存時間，計算生存率，并于注射NCPP或CP后第14天處死小鼠，稱量瘤重及體重，評價NCPP的抗腫瘤活性。另將&～uI／c小鼠隨機分為3組(NCPP組、CP組及PBS對照組，6只，組)，腹腔注射NCPP或CP，對照組注射等體積的PBS。注射后第14天處死

4、小鼠，分別稱體重、脾重、計算脾指數(shù)。山東大學碩士學位論文2．NCPP給藥后荷瘸小鼠骨髓細胞中DC及M由數(shù)量的檢測NcPP治療后第14天，制備荷瘤小鼠骨髓細胞懸液，裂解紅細胞后用PBS調(diào)濃度為lxl07／ml，F(xiàn)ITC-CDllc，PE-MHC-IImAb和PE-F4／80mAb流式抗體4"C避光標記30分鐘，PBS洗兩次，流式細胞儀檢測各類細胞的比例。3．荷瘸小鼠BMDCs的誘導及鑒定各組骨髓細胞以相同的數(shù)量種板，誘導培養(yǎng)至第9天，收集各組細胞，調(diào)濃度為lxl06／mi，F(xiàn)ITC．CDllcmAb，PE．MHC-IImAb標記，流式檢測各組BMDC名的誘導情況

5、。剩余細胞種24孔板(5x105／m1)，同時加入LPS(10ug／m1)。3TC，5％C02孵箱中培養(yǎng)48小時后，收集各組細胞，F(xiàn)ITC-CD80mAb抗體4"C避光標記30分鐘，PBS洗兩次，流式細胞儀檢測各組細胞CD80的表達情況．4．荷瘸小鼠BMDCs抗原遞呈功能檢測筒言之，將不同組BMDCs種96孔板(1x105／ml／100u1)，同時加入LPS(10ug／m1)，37℃，5％C02孵箱中培養(yǎng)48小時，加入CD8+T細胞磁珠分選正常C57BI／6小鼠脾臟得到的純化CD8+T細胞，使得CD8+T與BMDCs的比例為20：1，培養(yǎng)體系內(nèi)再加入狀態(tài)良好的

6、B16黑色素瘤細胞，終濃度為5x104／ml。共培養(yǎng)48小時后，應用CCK-8試劑盒檢測不同組BMDCs的抗原遞呈功能。結果1．NCPP抗腫瘤效應及脾激活作用各組荷瘤鼠腫瘤大小的測量結果顯示，與對照組相比，從注射NCPP或CP后第11天起，B16／NCPP和B16／ICP組小鼠黑色素瘤生長速度明顯減慢，同一時間點腫瘤體積明顯減小(M．01)，但是NCPP和CP組之間沒有顯著性差異(P>O．05)．脾激活實驗的測定結果顯示，NCPP和CP組小鼠脾激活明顯，脾指數(shù)的值與對照組比有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，表明NCPP具有與CP相似的抗腫瘤活性和脾激活效應．2．N

7、CPP給藥后荷窘小鼠骨髓DCs和M奪的數(shù)量變化流式檢測結果顯示，B16／PBS組小鼠骨髓DCs的陽性率為1．25±0．53％，Bt6／NCPP和B16／CP分別為2．65±0．38％和3．15_+0．25％，表明，與B1卯BS組相比，NCPP或2山東大學碩士學位論文CP處理顯著增加了小鼠骨髓DCs和M由的水平(P‘o．05)．3．NCPP給藥促進了荷癌鼠成熟DEs協(xié)同刺激分子的表達流式檢測結果表明，B16／PBS組DCs的陽性率為36．5土1．69％，而B16／NCPP組和B16／CP組BMDC羔的陽性率為分別為59A--蝴．49％和51．3+4．03％，表明

8、，與B16／PBS組相比，NCPP或C