加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷保護(hù)作用及其機(jī)理研究

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1、加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷保護(hù)作用及其機(jī)理研究作者:馬小娟,頡東升,何國梁【摘要】目的觀察加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷的保護(hù)作用以闡明其藥效和藥物作用機(jī)理。方法采用卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷模型,觀察本方對肝損傷小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性,脾、肝臟器系數(shù),肝臟病理組織學(xué)損傷程度的影響,并檢測小鼠肝組織勻漿丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,血清一氧化氮(NO)含量及腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量。結(jié)果加味茵陳五苓散和陽性對照

2、藥物五酯片均能顯著降低BCG/LPS免疫性肝損傷小鼠血清中升高的ALT、AST水平;且加味茵陳五苓散中劑量降酶作用優(yōu)于陽性對照組;對肝脾重量的增大有顯著的抑制作用;組織病理檢查結(jié)果顯示本品中、高劑量可減輕肝組織壞死范圍及程度,減少炎細(xì)胞浸潤,有明顯的保肝作用。同時發(fā)現(xiàn)中劑量藥物可顯著降低肝勻漿中升高的MDA水平,提高肝勻漿SOD水平,顯著降低血清中升高的NO含量和TNF-α含量。結(jié)論加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與其直接清除自由基、降低脂質(zhì)過氧化物水平、提高SOD活性、減少炎

3、性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等有關(guān)?!娟P(guān)鍵詞】加味茵陳五苓散;卡介苗(BCG);脂多糖(LPS);免疫性肝損傷  Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofModifiedYinChenethodsModifiedYinChenodifiedYinChenodifiedYinChenodifiedYinchenDAcontentandSODactivityinliverhomogenate,andreducethelevelsofNOandTNF-αinser

4、umobviously.ConclusionModifiedYinchenDA)測定試劑盒,批號:20080419;超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒,批號:20080418;蛋白測定試劑盒(考馬斯亮藍(lán)法)測定試劑盒,批號:20080419;一氧化氮NO測試盒(硝酸還原酶法),批號:20080419均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品;TNF-α試劑盒為晶美公司產(chǎn)品,批號:20080420。  1.4儀器與設(shè)備TDZ4-DA與SOD水平測定取肝臟約0.5g,用冰冷生理鹽水漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,

5、在冰浴盒上剪碎,用生理鹽水配成10%肝組織,使用勻漿器制備肝組織勻漿,低溫離心取上清液,按試劑盒說明書所述方法用紫外可見分光光度計測定肝勻漿中SOD,MDA含量。  2.2.4血清NO及TNF-α含量測定取血清0.1ml按試劑盒說明書所述方法用測定血清NO含量;另取血清0.1ml按試劑盒說明書所述方法檢測TNF-α(ELISA法)。  2.2.5肝組織病理學(xué)觀察取各組小鼠肝右葉同一部位,用10%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察各組肝臟組織病理變化情況?! ?.3統(tǒng)計學(xué)處理計量數(shù)據(jù)均以

6、±s表示,以t檢驗進(jìn)行組間比較。  3結(jié)果  3.1小鼠一般情況及小鼠死亡率正常對照組皮毛保持光滑亮澤,飲食正常,喜活動,體重增長正常,無1例死亡;模型對照組皮毛逐漸干枯稀疏,精神不振,體重較造模前增加不明顯,進(jìn)食與活動均明顯減少,造模后死亡數(shù)量較多,死亡率達(dá)33.3%。加味茵陳五苓散高中低劑量組小鼠皮毛尚可,飲食及活動情況基本接近正常組,體重增加情況較正常組略低于正常組而優(yōu)于模型組,死亡率分別為6.7%,6.7%和20%,低于模型組;五酯片組小鼠皮毛、飲食較正常組差,精神狀態(tài)及活動情況尚可,體重

7、增加情況好于模型組,死亡率為10.3%?! ?.2加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷小鼠血清ALT,AST的影響表1結(jié)果表明,與正常對照組相比較,模型組小鼠血清ALT,AST水平均明顯升高(P<0.01),表明BCG+LPS染毒后對小鼠肝細(xì)胞造成了嚴(yán)重的損傷;與模型組比較,加味茵陳五苓散高、中劑量組ALT值顯著降低(P<0.01),高、中劑量組AST值顯著降低(P<0.01),說明加味茵陳五苓散能減少肝細(xì)胞內(nèi)酶的逸出,對肝細(xì)胞有較明顯的保護(hù)作用;其中中劑量組效果更為顯著,低劑量組降酶作

8、用不明顯;與陽性對照組比較,低劑量組療效不及陽性組,中、高劑量組療效與陽性組接近,無顯著性差異。表1加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷小鼠血清ALT,AST的影響 模型組與正常對照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;各治療組與陽性對照組比較,#P<0.05,##P<0.01  3.3加味茵陳五苓散對免疫性肝損傷小鼠臟器系數(shù)的影響表2結(jié)果表明,模型組小鼠肝、脾系數(shù)明顯高于正常對照組(P<0.01

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