苦參堿對(duì)免疫性肝損傷保護(hù)作用的研究

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1、苦參堿對(duì)免疫性肝損傷保護(hù)作用的研究【摘要】目的探討苦參堿對(duì)免疫性肝損傷的治療作用。方法采用豬血清腹腔注射法，導(dǎo)致大鼠肝損傷。采用苦參堿肌注治療。利用電鏡技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)及貯脂細(xì)胞α肌動(dòng)蛋白變化。結(jié)果苦參堿治療后肝細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)損傷恢復(fù)或減輕，貯脂細(xì)胞減少，其胞質(zhì)中α肌動(dòng)蛋白表達(dá)減少。結(jié)論苦參堿對(duì)大鼠免疫性肝損傷有保護(hù)作用，并有量效關(guān)系。【關(guān)鍵詞】大鼠肝臟超微結(jié)構(gòu)苦參堿免疫組織化學(xué)StudyontheProtectiveEffectofMatrineonImmuneLiverInjuryinRatsAbstract：Object

2、iveToinvestigatetheprotectiveeffectofmatrineonimmuneliverinjuryinwereadministratedintraabdominallyswineserumtoinduceimmuneliverinjurymodel,thenweretreatedwithmatrine.Theultrastructureoflivercellandα-SMAoffatstoringcellwereexaminedbyelectronicmicroscopicobservationandimmunohistoc

3、hemicalmembranestructureinjuryoflivercellwasrestored,thefatstoringcelldecreased,andtheexpressionofδ-SMAwerehadtheeffectofanti-immuneliverinjuryinadose-dependentmanner.Keywords：Rats；Liver；Ultrastructure;Matrine；Immunohistochemistry苦參堿是豆科植物苦參的提取物。由于苦參在我國分布廣泛，是傳統(tǒng)的中草藥，其提取物在臨床也被廣泛應(yīng)用［

4、1，2］。為探討苦參堿對(duì)肝臟的保護(hù)作用，我們利用免疫性肝損傷動(dòng)物模型及電子顯微技術(shù)和免疫組織化學(xué)染色方法，觀察不同劑量苦參堿對(duì)肝細(xì)胞和肝貯脂細(xì)胞的影響，旨在闡明苦參堿對(duì)肝臟保護(hù)作用的機(jī)制。為預(yù)防和治療肝病提供新途徑?！　?材料與方法動(dòng)物及分組成年Wister大鼠40只，隨機(jī)分為①正常對(duì)照組、②模型組、③苦參堿治療1組和④治療2組，每組10只。復(fù)制免疫性肝損傷模型及治療方法將②③④組大鼠腹腔注射豬血清，1次/周，持續(xù)8周；①組大鼠每周腹腔注射生理鹽水，共8周。之后治療③組肌注苦參堿注射液1mg/kg；連續(xù)治療6周。④組肌肉注射苦參堿/kg治療6周，然后麻

5、醉大鼠開腹取肝臟。組織固定及切片將數(shù)小塊肝組織固定于%戊二醛內(nèi)，2h。然后常規(guī)制做超薄切片和鈾-鉛染色，供透射電鏡觀察。另取肝組織固定于10%中性甲醛內(nèi)2h，常規(guī)石蠟包埋切片厚μm，裱于涂膠玻片，37℃貯存待染。免疫組織化學(xué)染色將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，常規(guī)SP免疫組化方法染色。其中α-肌動(dòng)蛋白多克隆抗體及SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。按試劑盒規(guī)程操作。陰性對(duì)照用PBS代替Ⅰ抗，陽性對(duì)照為公司提供。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理組間比較采用t檢驗(yàn)。　　2結(jié)果.1肝組織超微結(jié)構(gòu)變化模型組肝臟內(nèi)匯管區(qū)擴(kuò)大，膠原纖維增多，甚至出現(xiàn)假小葉，間質(zhì)細(xì)胞成分增多，其中有較多貯

6、脂細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和少數(shù)粒細(xì)胞。電鏡下肝細(xì)胞核膜出現(xiàn)鋸齒狀凹陷，核周隙寬窄不均勻，異染色質(zhì)增多；胞質(zhì)內(nèi)高電子密度脂滴增多，線粒體腫脹，嵴減少或消失，甚至可見部分線粒體膜破裂現(xiàn)象。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，呈泡狀或不規(guī)則腔隙。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒。治療組肝細(xì)胞核膜凹陷減少，核周隙均勻。胞質(zhì)內(nèi)線粒體基本恢復(fù)正常，不見膜破裂現(xiàn)象，但仍有嵴減少表現(xiàn)；少數(shù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒。.2貯脂細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化及免疫組化染色正常對(duì)照組貯脂細(xì)胞小而少，分布在匯管區(qū)或小葉周邊竇周隙內(nèi)。電鏡下細(xì)胞器少，超薄切片中常見其胞質(zhì)中有1～3個(gè)脂滴樣包含物。模型組貯脂細(xì)胞增多，胞體稍增大，胞質(zhì)中粗面內(nèi)質(zhì)

7、網(wǎng)及線粒體增多，脂滴樣包含物明顯減少。免疫組化染色后，αSMA呈棕黃色顆粒，分布于胞質(zhì)中。模型αSMA著色深，治療組貯脂細(xì)胞減少，αSMA著色淺。經(jīng)彩色圖象分析儀進(jìn)行形態(tài)學(xué)定量分析。結(jié)果見表1。表1免疫組化染色質(zhì)貯脂細(xì)胞數(shù)密度及灰度值　　3討論采用豬血清注射法模擬免疫性肝損傷，其基本病理過程與病毒性肝炎所致肝纖維化類似。由于抗原抗體復(fù)合物沉積在肝內(nèi)，導(dǎo)致肝微循環(huán)受阻，肝細(xì)胞及匯管區(qū)間質(zhì)細(xì)胞代謝障礙，同時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞，庫氏細(xì)胞產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子進(jìn)一步影響肝細(xì)胞及貯脂細(xì)胞啟動(dòng)肝纖維化過程。導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷和貯脂細(xì)胞增多及激活?？鄥A屬四環(huán)喹

8、諾里西啶生物堿,有廣泛的藥理作用［3］。臨床應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)研究表明，苦參堿對(duì)中樞神經(jīng)有鎮(zhèn)靜作用，對(duì)