苦參堿對balb-c免疫性肝損傷小鼠的保護(hù)作用

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1、苦參堿對BALB/c免疫性肝損傷小鼠的保護(hù)作用【關(guān)鍵詞】苦參堿免疫性肝損傷卡介苗脂多糖苦參堿(matrine，Mat)是從豆科槐屬植物苦豆子(SophoraalopecuroidesL)中提取物的生物堿，具有抗炎、抗病毒、提高免疫力、保護(hù)肝臟功能的作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，Mat對CCl4致肝損傷動物模型有肝細(xì)胞保護(hù)作用［1］，但目前尚未見到苦參堿對卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)誘發(fā)BALB/c小鼠免疫性肝損傷保護(hù)作用的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以BALB/c小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，探討苦參堿對BCG+LPS免疫性肝損傷的保護(hù)作用?！　?

2、材料與方法　　1.1動物BALB/c小鼠，雄性，6～8周齡，清潔級，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK(寧)2005-0001，在室溫(21～23℃)、普通光照環(huán)境中飼養(yǎng)1周后實(shí)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水?！　?.2藥物Mat購自寧夏紫荊花藥業(yè)有限公司，批號：80041122，白色結(jié)晶；聯(lián)苯雙酯購自浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號：071003，每滴丸含聯(lián)苯雙酯1.5mg，臨用前用生理鹽水配至所需濃度?！　?.3主要試劑BCG系衛(wèi)生部上海生物制品研究所產(chǎn)品，批號：200709001。LPS系美國Sigm

3、a公司產(chǎn)品，批號：LOT2010/08。MDA、GSH-Px、T-AOC試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號：20080306，考馬斯亮藍(lán)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號：20080625?！　?.4主要儀器AE100電子精密天平(METTLER)；UV/9100型紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司)；TD5A-at給藥組(20、40、80mg/kg)、陽性對照組即聯(lián)苯雙酯組(bifendate，150mg/kg)。造模方法參照文獻(xiàn)［3-5］，除正常對照組外，其余各組第1天經(jīng)小鼠腹腔注射BCG2

4、.5mg/0.2mL/只(約含5.0×107個(gè)活菌數(shù))，第2天起，各給藥組按0.1mL/10g體積分別給予不同劑量Mat和bifendate(聯(lián)苯雙酯)進(jìn)行治療，模型組和正常對照組給予同等體積NS，每天1次，灌胃給藥，連續(xù)10d，第12天小鼠尾靜脈注射LPS(7.5μg/0.2mL/只)進(jìn)行攻擊。注射LPS后，禁食12h，頸椎脫臼后頸靜脈放血處死小鼠，立即摘取小鼠肝臟、脾臟標(biāo)本進(jìn)行有關(guān)檢測?！　?.5.2指標(biāo)檢測取肝臟、脾臟稱重，計(jì)算臟器指數(shù)［臟器重量(g)/體重(g)×1000］。冰浴下在肝右葉相同部位取肝臟0

5、.5g，用冷生理鹽水洗去污血，加生理鹽水制成10%的肝勻漿，離心10min，取上清液檢測指標(biāo)MDA、GSH-Px、T-AOC(按試劑盒說明書進(jìn)行)?！　?.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法結(jié)果以(±s)表示，用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。　　2結(jié)果　　2.1Mat對免疫性肝損傷小鼠肝臟、脾臟指數(shù)的影響　　與正常對照組相比較，模型組小鼠肝臟、脾臟明顯腫大，Mat20、40、80mg/kg及陽性對照組均能降低免疫性肝損傷小鼠的肝臟、脾臟指數(shù)(P＜0.01)，見表1?！　”?Mat對免疫性肝損傷小

6、鼠肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響（略）　　與模型組比較＃＃P＜0.01；與正常組比較△P＜0.01　　2.2Mat對免疫性肝損傷小鼠GSH-Px、T-AOC、MDA的影響　　與正常對照組比較，模型組肝勻漿GSH-Px、T-AOC水平明顯降低，同時(shí)MDA水平升高(P＜0.05)。Mat(20、40、80mg/kg)治療組及Bif陽性對照組(150mg/kg)均能升高降低的GSH-Px、T-AOC水平，并降低升高的MDA水平(P＜0.05)，見表2?！　”?Mat對免疫性肝損傷小鼠肝勻漿MDA、SOD和GSH-Px水平的影

7、響（略）　　與模型組比較＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與正常組比較△P＜0.05，△△P＜0.01　　3討論　　BCG+LPS免疫性肝損傷模型主要表現(xiàn)為Kuppfer細(xì)胞、單核細(xì)胞在致炎因子的作用下，向肝臟聚集并被致敏［2］。其病理機(jī)制與人肝炎的免疫功能紊亂相似，類似于人類肝炎發(fā)生的病理生理過程，是篩選和研究保肝藥物較為理想的模型之一?！　≡缙谘芯堪l(fā)現(xiàn)，許多慢性肝炎患者存在諸多抗體，于是人們采取了多種方法建立了免疫性肝損傷模型［6］。目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，乙型肝炎病毒感染引起的肝損傷主要與機(jī)體免疫應(yīng)答有關(guān)，宿主

8、免疫調(diào)節(jié)紊亂是病理損傷的主要原因，其中細(xì)胞因子與其密切相關(guān)，并能加重肝炎病情。與化學(xué)性肝損傷模型(CCl4、D-Gal等)相比，免疫性肝損傷動物模型類似于人類肝炎發(fā)生的病理生理過程，是篩選和研究保肝藥物較為理想的模型之一［7］。最新研究證明，肝損傷的發(fā)生發(fā)展與集聚在肝臟中的巨噬細(xì)胞(MΦ)的確有密切關(guān)系。BCG+LPS所致肝損傷的機(jī)制主要為巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性肝損傷，BC