苦參堿對免疫性肝損傷保護作用的研究.doc

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1、苦參堿對免疫性肝損傷保護作用的研究【摘要】目的探討苦參堿對免疫性肝損傷的治療作用。方法采用豬血清腹腔注射法，導致大鼠肝損傷。采用苦參堿肌注治療。利用電鏡技術(shù)和免疫組織化學方法觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)及貯脂細胞α肌動蛋白變化。結(jié)果苦參堿治療后肝細胞膜性結(jié)構(gòu)損傷恢復或減輕，貯脂細胞減少，其胞質(zhì)中α肌動蛋白表達減少。結(jié)論苦參堿對大鼠免疫性肝損傷有保護作用，并有量效關(guān)系。【關(guān)鍵詞】大鼠肝臟超微結(jié)構(gòu)苦參堿免疫組織化學　　StudyontheProtectiveEffectofMatrineonImmuneLiverInjuryinRats　　Abstract：ObjectiveToinve

2、stigatetheprotectiveeffectofmatrineonimmuneliverinjuryinrats.MethodsRatswereadministratedintraabdominallyswineserumtoinduceimmuneliverinjurymodel,thenweretreatedwithmatrine.Theultrastructureoflivercellandα-SMAoffatstoringcellwereexaminedbyelectronicmicroscopicobservationandimmunohistochemica

3、lstaining.ResultsThemembranestructureinjuryoflivercellwasrestored,thefatstoringcelldecreased,andtheexpressionofδ-SMAwerereduced.ConclusionMatrinehadtheeffectofanti-immuneliverinjuryinadose-dependentmanner.　　Keywords：Rats；Liver；Ultrastructure;Matrine；Immunohistochemistry苦參堿是豆科植物苦參（別名苦豆子、廣豆根、苦

4、骨、川參等）的提取物。由于苦參在我國分布廣泛，是傳統(tǒng)的中草藥，其提取物在臨床也被廣泛應(yīng)用［1，2］。為探討苦參堿對肝臟的保護作用，我們利用免疫性肝損傷動物模型及電子顯微技術(shù)和免疫組織化學染色方法，觀察不同劑量苦參堿對肝細胞和肝貯脂細胞的影響，旨在闡明苦參堿對肝臟保護作用的機制。為預防和治療肝病提供新途徑?！　?材料與方法　　1.1動物及分組成年Wister大鼠40只，隨機分為①正常對照組、②模型組、③苦參堿治療1組（大劑量組）和④治療2組（小劑量組），每組10只?！　?.2復制免疫性肝損傷模型及治療方法將②③④組大鼠腹腔注射豬血清0.5ml，1次/周，持續(xù)8周；①組大鼠每周腹腔

5、注射生理鹽水0.5ml，共8周。之后治療③組肌注苦參堿注射液（廣州明興制藥廠生產(chǎn)，批號970314）15mg/kg；連續(xù)治療6周。④組肌肉注射苦參堿7.5mg/kg治療6周，然后麻醉大鼠開腹取肝臟。3　　1.3組織固定及切片將數(shù)小塊肝組織固定于2.5%戊二醛內(nèi)，24h。然后常規(guī)制做超薄切片和鈾-鉛染色，供透射電鏡觀察。另取肝組織固定于10%中性甲醛內(nèi)24h，常規(guī)石蠟包埋切片厚5μm，裱于涂膠玻片，37℃貯存待染?！　?.4免疫組織化學染色將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，常規(guī)SP免疫組化方法染色。其中α-肌動蛋白（α-SMA）多克隆抗體及SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。按試劑盒

6、規(guī)程操作。陰性對照用PBS代替Ⅰ抗，陽性對照為公司提供?！　?.5統(tǒng)計學處理組間比較采用t檢驗?！　?結(jié)果　　2.1肝組織超微結(jié)構(gòu)變化模型組肝臟內(nèi)匯管區(qū)擴大，膠原纖維增多，甚至出現(xiàn)假小葉，間質(zhì)細胞成分增多，其中有較多貯脂細胞、成纖維細胞、淋巴細胞和少數(shù)粒細胞。電鏡下肝細胞核膜出現(xiàn)鋸齒狀凹陷，核周隙寬窄不均勻，異染色質(zhì)增多；胞質(zhì)內(nèi)高電子密度脂滴增多，線粒體腫脹，嵴減少或消失，甚至可見部分線粒體膜破裂現(xiàn)象。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，呈泡狀或不規(guī)則腔隙。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒。治療組肝細胞核膜凹陷減少，核周隙均勻。胞質(zhì)內(nèi)線粒體基本恢復正常，不見膜破裂現(xiàn)象，但仍有嵴減少表現(xiàn)；少數(shù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒?！　?.2貯

7、脂細胞超微結(jié)構(gòu)變化及免疫組化染色正常對照組貯脂細胞小而少，分布在匯管區(qū)或小葉周邊竇周隙內(nèi)。電鏡下細胞器少，超薄切片中常見其胞質(zhì)中有1～3個脂滴樣包含物。模型組貯脂細胞增多，胞體稍增大，胞質(zhì)中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體增多，脂滴樣包含物明顯減少。免疫組化染色后，αSMA呈棕黃色顆粒，分布于胞質(zhì)中。模型αSMA著色深，治療組貯脂細胞減少，αSMA著色淺。經(jīng)彩色圖象分析儀進行形態(tài)學定量分析。結(jié)果見表1。表1免疫組化染色質(zhì)貯脂細胞數(shù)密度及灰度值（略）　　3討論采用豬血清注射法模擬免疫性肝損傷（肝纖維化