瑣瑣葡萄多糖對大鼠體外免疫性肝損傷保護(hù)作用的研究

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1、瑣瑣葡萄多糖對大鼠體外免疫性肝損傷保護(hù)作用的研究作者：劉濤馬龍趙軍蘇德奇【摘要】目的研究瑣瑣葡萄多糖（VVP）在體外對大鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用。方法采用熱水提取、乙醇沉淀，Sevage法除蛋白、透析分離純化提取VVP，苯酚硫酸法測定多糖含量。采用BCG整體致敏，LPS離體攻擊法建立大鼠原代肝細(xì)胞免疫損傷模型，取細(xì)胞上清液測定其ALT，AST活性和NO含量。結(jié)果瑣瑣葡萄中多糖含量為8.19％；VVP5，20，80μg/ml均可程度不同地使BCG+LPS損傷后升高的大鼠肝細(xì)胞上清ALT，AST活性和NO含量明顯下降，其作

2、用與陽性對照藥物甘立欣（Grz）相似。結(jié)論VVP在體外對大鼠免疫性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】瑣瑣葡萄；多糖；肝細(xì)胞；免疫性肝損傷Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofpolysaccharideisolatedformVitisviniferalonimmunologicalliverinjurymodelinvitro.MethodsVitisamurensisPolysaccharideetryineitscontent.Theimmunologicalhepatotox

3、icitymodeletteGuerin(BCG)pluslipopolysaccharides(LPS)invitro.Thesupernatantofcellsafter3～24hincubationationofALT,ASTandNOrespectively.ResultsThecontentofpolysaccharideinVitisamurensisentl)indifferentdoses.TheeffectsofVVPmentionedaboveilartothoseofthestandarddrug

4、,DinmmoniumGlycyrrhizinate(Grz).ConclusionVitisviniferalpolysaccharideshomunologicalliverdamageinducedbyBCGplusLPSinvitro.Keymunologicalliverinjury瑣瑣葡萄為葡萄科葡萄屬植物瑣瑣葡萄VitisviniferalL.的成熟果實(shí)，主產(chǎn)于新疆吐魯番、和田、鄯善等地，是維吾爾醫(yī)習(xí)用的一種藥食兼用植物，藥用果實(shí)，具有健脾胃、理肺、生津、養(yǎng)血等作用。維醫(yī)用于治療脾胃不和、神志不安等，民間

5、用于小兒麻疹、肝炎等癥［1］?，崿嵠咸阎谐写罅康钠咸烟恰⒐?、維生素、氨基酸等營養(yǎng)成分外，還有鞣質(zhì)類、黃酮、萜類、多糖等多種生物活性物質(zhì)［2～4］。研究表明多糖（polysaccharides）具有增強(qiáng)免疫、抗氧化、抗腫瘤、降血脂、抗衰老、抗輻射等多方面的藥理作用［5］，是近年來天然藥物研究的熱點(diǎn)課題之一。為探討多糖與瑣瑣葡萄抗病毒免疫調(diào)節(jié)活性的相互關(guān)系，本研究采用熱水提取、乙醇沉淀，Sevage法除蛋白、透析分離純化提取了瑣瑣葡萄多糖（VVP），苯酚硫酸法測定多糖含量，并采用BCG整體致敏，LPS離體攻擊法建立大

6、鼠原代肝細(xì)胞免疫損傷模型，探討了VVP在體外對大鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用。1器材1.1動物SD大鼠，雄性，體重（200±20）g，新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心提供（SPF級，動物使用許可證號：SYXK［新］2003-0001）。1.2藥材瑣瑣葡萄購自新疆維吾爾自治區(qū)吐魯番維藥市場，經(jīng)專家鑒定為VitisviniferalL.的果實(shí)。1.3儀器與試劑UV2501PC型雙光束紫外分光光度計（日本島津）；SaBa18AMS全自動生化分析儀（Roma-Italy）；Forma二氧化碳培養(yǎng)箱；XD711型酶標(biāo)儀（上海迅達(dá)醫(yī)療器械有限

7、公司）；DZK88-A型電熱恒溫真空干燥箱(上海醫(yī)療器械七廠)；CQ-50型超聲波清洗器(上海超聲波儀器廠)；METTLERTOLEDOAB104-N型分析天平(Mettler-ToledoInstr.shanghaiLtd)。甘立欣（Grz，江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號060808）；Ⅳ型膠原酶、LPS（Ecoli0555:B5）（Sigma公司）；DMEM培養(yǎng)基（GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批號061205）；卡介苗（BCG，上海生物制品檢定所，批號0601001）；谷草轉(zhuǎn)氨酶

8、（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司），N-萘基-乙烯二胺、對氨基苯磺酰胺（Fluka進(jìn)口分裝）。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。2方法2.1VVP的提取及含量測定瑣瑣葡萄藥材300g，粉碎，過40目篩，加10倍體積的水回流提取3次，3h/次，提取液合并后減壓濃縮至適量，再加入5倍體積的95%乙醇，靜置過夜