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《白氏文昌魚IKK基因的克隆及其免疫功能分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：f虱孔芻日期：如tj}ts’坫學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、
2、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。(保密論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋：本學(xué)位論文屬于保密論文，密級：Z區(qū)鹽保密期限為——年。學(xué)位論文作者簽名：C虱昀指導(dǎo)教師簽名：日期：沙啊s、沾Lt期：．土‘摘要形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)的證據(jù)表明文昌魚是脊索動物中的基底生物，是研究脊椎動物形態(tài)、發(fā)育以及免疫系統(tǒng)的起源與進(jìn)化的重要模式生物。隨著比較免疫學(xué)的迅速發(fā)展，以及佛羅里達(dá)文昌魚基因組測序的完成，關(guān)于文昌魚免疫的研究越來越引起人們的關(guān)注。因此，本研究在
3、文昌魚EST數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上，利用分子生物學(xué)方法初步研究了文昌魚IKK基因在LPS刺激后的免疫應(yīng)答方面的機(jī)制，同時結(jié)合進(jìn)化分析了文昌魚IKK基因在進(jìn)化中的地位，本論文主要的研究成果如下：(1)利用RACE對白氏文昌魚的AmphilKK基因進(jìn)行克隆，結(jié)果表明AmphilKK基因的cDNA序列全長3087bp，其中ORF包含2334bp，預(yù)計編碼777aa，5’UTR包含164bp，3’UTR包含589bp。(2)經(jīng)過初步分析表明，AmphiIKK的理論分子量為89．3kDa，等電點為6．26；AmphiIKK與之前發(fā)現(xiàn)
4、的IKK蛋白之間存在著43．8％．64．0％的相似性，23．6％．43．3％的一致性。AmphiIKK蛋白具有哺乳動物IKK蛋白一樣，具有一個保守的絲氨酸／蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，在這個結(jié)構(gòu)域中，含有一個絲氨酸／蘇氨酸激酶活化位點和一個保守的MAPKK活化莖環(huán)。與人類的IKKa和IKKl3比較，文昌魚IKK蛋白同樣具有一個潛在的HLH基序，一個LZ結(jié)構(gòu)，和NBD結(jié)構(gòu)。AmphiIKK蛋白的空間三級結(jié)構(gòu)與其他7個物種的IKK蛋白均相同，均折疊成“手槍”狀。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，AmphiIKK間于無脊椎動物和脊椎動物之間，和合
5、浦珠母貝、太平洋牡蠣等無脊椎動物更為接近。(3)實時定量檢測表明IKK基因在所有檢測的組織中均表達(dá)，其中在肌肉、鰓和脊索中表達(dá)最為豐富。在LPS刺激后，AmphilKK在6h有1．46倍的表達(dá)量，在8h時有1．80倍的表達(dá)量，在12h后趨于平常，表明在外源LPS刺激后文昌魚IKK基因表現(xiàn)出上調(diào)趨勢。關(guān)鍵詞：文昌魚；Ird3激酶；NF．r,B：LPS；適應(yīng)性免疫AbstractBothmorphologicalandmolecularevidenceshowthatamphioxusisthebasalchordat
6、eandisacrucialorganismforunderstandingthechordateevolutionincludingtheoriginoftheimmunesystem，morphologyanddevelopment．Withtherapiddevelopmentofcomparativeimmunology，aswellasthecompletionoftheBranchiostomafloridaegenomesequencing,theattentionWasfocusedonamphio
7、xusimmuneincreasingly．Therefore，thisstudyonthebasisofAmphioxusESTdatabase，usedmolecularbiologymethodstostudyAmphilKKgeneafterLPSstimulationmechanism，whileanalyzedtheAmphilKKgeneevolution．Themainresultsofthethesisareasfollow：(1)TakingadvantageoftheIKKconservedd
8、omainandESTlibraryofamphioxus(Branchiostomafloridae)，wesearched，amplifiedandvalidateda627bpeDNAfragmentfromamphioxus．Basedonthe627bpfragment，a480bpanda2543bpfragmentwereamplifiedby
