《植物DNA分子標(biāo)記》PPT課件

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1、植物DNA分子標(biāo)記分子標(biāo)記的概念廣義的分子標(biāo)記（molecularmarker）：可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白。包括蛋白質(zhì)標(biāo)記和DNA標(biāo)記（狹義的分子標(biāo)記）。蛋白質(zhì)標(biāo)記包括動植物蛋白、同工酶及等位酶理想的分子標(biāo)記：1.高多態(tài)性2.共顯性遺傳*3.能明確辨別等位基因4.遍布整個(gè)基因組5.無基因多效性**6.檢測手段簡單快速7.成本低廉8.重復(fù)性好*雜合子的一對等位基因各自都具有自己的表型效應(yīng)，稱為共顯性（codominance）**基因多效性（genepleiotropism）：一個(gè)基因產(chǎn)生多種表型效應(yīng)的現(xiàn)象。DNA分子標(biāo)記

2、（DNAmolecularmarker）直接在DNA分子水平上檢測生物間的差異，是DNA水平上遺傳變異的直接反應(yīng)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在DNA分子標(biāo)記技術(shù)已有數(shù)十種，廣泛應(yīng)用于遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關(guān)系鑒別、基因庫構(gòu)建、基因克隆等方面。DNA分子標(biāo)記大多以電泳譜帶的形式表現(xiàn)，分為非PCR依賴的分子標(biāo)記(基于Southern雜交技術(shù)的分子標(biāo)記)和PCR依賴的分子標(biāo)記。非PCR依賴的分子標(biāo)記(基于Southern雜交技術(shù)的分子標(biāo)記)包括：限制性片段長度多態(tài)性標(biāo)記（restrictionfragmentlen

3、gthpolymorphism,RFLP）原位雜交（insituhybridization）PCR依賴的分子標(biāo)記：隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記（randomamplificationpolymorphismDNA,RAPD）DNA擴(kuò)增指紋印記（DNAamplificationfingerprinting,DAF）簡單序列重復(fù)標(biāo)記（simplesequencerepeat,SSR）隨機(jī)引物聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（arbitrarilyprimedPCR,AP-PCR）擴(kuò)增片段長度多態(tài)性標(biāo)記（amplifiedfragmentlengthpol

4、ymorphism,AFLP）基于分子雜交技術(shù)的分子標(biāo)記技術(shù)此類標(biāo)記技術(shù)是利用限制性內(nèi)切酶解及凝膠電泳分離不同的生物DNA分子，然后用經(jīng)標(biāo)記的特異DNA探針與之進(jìn)行雜交，通過放射自顯影或非同位素顯色技術(shù)來揭示DNA的多態(tài)性。分子雜交：由具有互補(bǔ)堿基順序的任何兩條單鏈核酸分子片斷形成雙鏈的過程。染色體原位雜交是指DNA探針與染色體上的DNA雜交，并在染色體上直接進(jìn)行檢測的分子技術(shù)，其原理是兩條核苷酸單鏈片斷在適宜的條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA雙鍵分子，用帶有標(biāo)記的DNA或者RNA片斷作為

5、核酸探針，與細(xì)胞內(nèi)染色體雜交，用放射自顯影等方法予以顯示，在熒光顯微鏡下觀察目的mRNA或者DNA的存在與定位。InsituhybridizationForinsituhybridization,atissuesampleisincubatedwithalabelednucleicacidprobe,excessprobeiswashedawayandthelocationofhybridizedprobeisexamined.Thetechniqueenablesthespatiallocalizationofgeneexpr

6、essiontobedeterminedaswellasthelocationofindividualgenesonchromosomes.bcdaFig.5GISHimagesofchromosomesoftetraploidanddiploidFestuloliumprogenies.TheDNAofL.perennewasusedasprobe,andshownasbluecolor.ThechromosomesofF.pratensiswereshownaspalebluecolor.Translocationbreak

7、pointsareindicatedinaandcbyarrows.(a)Bx350-184,a28-chromosomegenomewithatleast14intergenerictranslocations,someofwhichhavetwobreakpointsinanarm(arrows).Bar:10μm.(b)Bx351-160,a28-chromosomegenomewithintergenerictranslocations.Bar:20μm.(c)Bx350-177withfertilepollen,a28

8、-chromosomegenomecomprisingapproximatelyequalamountofLoliumandFestucaDNAwith9intergenerictranslocations,someofwhichhavetwobreakpoin