川貝母2015藥典

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1、川貝母ChuanbeimuFRITILLARIAECIRRHOSAEBULBUS本品為百合科植物川貝母FritiLlariacirrhosaD．Don、暗紫貝母FritiLlariaunibracteataHsiaoetK.C．Hsia、甘肅貝母Fritillariaprzewal3'kiiMaxim，、梭砂貝母FritiLlariadelavayiFranch．、太白貝母FritillariataipaiensisP．Y．Li或瓦布貝母FritillariaunibracteataHsiaoetK.C．Hsiavar.wabuensis(SY.TangetSC.Yue)Z.D.Liu,S.W

2、angetS．C．Chen的干燥鱗莖。按性狀不同分別習(xí)稱“松貝”、“青貝”、“爐貝”和“栽培品”。夏、秋二季或積雪融化后采挖，除去須根、粗皮及泥沙，曬干或低溫干燥?！拘誀睢克韶惓暑悎A錐形或近球形，高0.3～0.8cm，直徑0.3～0.9cm。表面類白色。外層鱗葉2瓣，大小懸殊，大瓣緊抱小瓣，未抱部分呈新月形，習(xí)稱“懷中抱月”；頂部閉合，內(nèi)有類圓柱形、頂端稍尖的心芽和小鱗葉1～2枚；先端鈍圓或稍尖，底部平．微凹人，中心有1灰褐色的鱗莖盤，偶有殘存須根。質(zhì)硬而脆，斷面白色，富粉性。氣微，味微苦。青貝呈類扁球形，高0.4～1.4cm，直徑0.4～1.6cm。外層鱗葉2瓣，大小相近，相對(duì)抱合，頂部開裂

3、，內(nèi)有心芽和小鱗葉2～3枚及細(xì)圓柱形的殘莖。爐貝呈長(zhǎng)圓錐形，高0.7～2.5cm，直徑0.5～2.5cm。表面類白色或淺棕黃色，有的具棕色斑點(diǎn)。外層鱗葉2瓣，大小相近，頂部開裂而略尖，基部稍尖或較鈍。栽培品呈類扁球形或短圓柱形，高0.5～2cm，直徑1～2.5cm。表面類白色或淺棕黃色?稍粗糙，有的具淺黃色斑點(diǎn)。外層鱗葉2瓣，大小相近，頂部多開裂而較平?！捐b別】(1)本品粉末類白色或淺黃色。松貝、青貝及栽培品淀粉粒甚多，廣卵形、長(zhǎng)圓形或不規(guī)則圓形，有的邊緣不平整或略作分枝狀，直徑5～64μm，臍點(diǎn)短縫狀、點(diǎn)狀、人字狀或馬蹄狀，層紋隱約可見。表皮細(xì)胞類長(zhǎng)方形，垂周壁微波狀彎曲，偶見不定式氣孔，圓

4、形或扁圓形。螺紋導(dǎo)管直徑5～26μm。爐貝淀粉粒廣卵形、貝殼形、腎形或橢圓形，直徑約至60μm，臍點(diǎn)人字狀、星狀或點(diǎn)狀，層紋明顯。螺紋導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑可達(dá)64μm。(2)取本品粉末lOg，加濃氨試液lOml，密塞，浸泡1小時(shí)，加二氯甲烷40ml，超聲處理1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取貝母素乙對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)．吸取供試品溶液1～6μm1、對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液-水(18：2：1：0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以稀碘

5、化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(3)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)性方法。模板DNA提取取本品0.lg,依次用75%乙醉1ml、滅菌超純水lml淸洗，吸干表面水分，置乳缽中研磨成極細(xì)粉。取20mg,置1.5ml離心管中，用新型廣譜植物基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA[加人緩沖液AP1400μ1和RNA酶溶液（10mg/ml)4μ1,渦漩振蕩，65℃水浴加熱10分鐘，加入緩沖液AP2130μ1，充分混勻，冰浴冷卻5分鐘，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘14000轉(zhuǎn)）10分鐘；吸取上淸液轉(zhuǎn)移入另一離心管中，加人1.5倍體積的緩沖液AP3/E，

6、混勻，加到吸附柱上，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘13000轉(zhuǎn)）1分鐘，棄去過濾液，加入漂洗液700μ1，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)）30秒，棄去過濾液；再加入漂洗液500μ1，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn))30秒，棄去過濾液;再離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘13000轉(zhuǎn)）2分鐘，取出吸附柱，放入另一離心管中，加入50μ1洗脫緩沖液，室溫放置3?5分鐘，離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)）1分鐘，將洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)）1分鐘],取洗脫液，作為供試品溶液，置4℃冰箱中備用。另取川貝母對(duì)照藥材O.lg，同法制成對(duì)照藥材模板DNA溶液。PCR-RFLP反應(yīng)鑒別引物：5'C

7、GTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3’和5’GCTACGTTCTTCATCGAT3'。PCR反應(yīng)體系：在200μ1離心管中進(jìn)行，反應(yīng)總體積為30μ1，反應(yīng)體系包括10XPCR緩沖液3μ1，二氯化鎂（25mmol/L)2.4μ1,dNTP(10mmol/L)0.6μ1,鑒別引物（30μmol/L)各0.5μ1，高保真TaqDAN聚合酶（5U/μ1)0.2μ1,模板1μ1，無(wú)菌超純水21