蚓激酶活性測定方法.doc

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1、蚓激酶YinjimeiLumbrokinase本品系人工養(yǎng)殖的赤子愛勝蚓（EiseniaFoetidaSavigny）中提取制備的一組蛋白水解酶。按干燥品計算，每1mg效價應不得少于12000單位。每1mg蛋白中蚓激酶比活力不得少于20000單位。【性狀】本品為淡黃色至黃褐色粉末；味腥，有引濕性?！捐b別】（1）取本品適量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，照分光光度法（中國藥典2000年版二部附錄IVA）測定，在278nm的波長處有最大吸收。（2）取本品適量，加0.9％氯化鈉溶液制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；用6號針頭取動物血1滴于試管底部，30

2、分鐘后，加供試品溶液1ml置試管中，輕輕搖動，血凝塊應在60分鐘內(nèi)溶解。以0.9％氯化鈉溶液1ml為空白，同法操作，血凝塊應不溶解?！緳z查】酸堿度取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，依法測定（中國藥典2000年版二部附錄VIH），pH值應為6.0～8.0。溶液的澄清度與顏色取本品適量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，溶液應澄清；如顯色，與黃色2號標準比色液（中國藥典2000年版二部附錄IXA第一法）比較，不得更深。干燥失重取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥至恒重，減失重量不得超過5.0％（中國藥典2000年版二部附錄VIIIL）。【比活力測定】

3、效價測定（1）試劑0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8）取磷酸氫二鈉3.58g，加水使溶解并稀釋至1000ml為A液；取磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）0.78g，加水使溶解并稀釋至500ml為B液；將A、B兩液混合至pH值為7.8。工作溶液取0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8）與0.9％氯化鈉溶液（1:17）混合。1.5%瓊脂糖溶液取瓊脂糖1.5g，加工作溶液100ml加熱溶解。纖維蛋白原溶液取纖維蛋白原適量，加工作溶液制成每1ml中含1.5mg的可凝蛋白溶液。凝血酶溶液取凝血酶，加0.9％氯化鈉溶液制成每1ml中含1BP單位的溶液。（2）標準品

4、溶液的制備取蚓激酶標準品，用0.9％氯化鈉溶液制成濃度分別為每1ml中含10000，8000，6000，4000，2000蚓激酶單位的溶液。（3）供試品溶液的制備取本品適量，加0.9％氯化鈉溶液使溶解并稀釋成標準曲線范圍內(nèi)的濃度。（4）測定法取纖維蛋白原溶液39ml，置燒杯中，邊攪拌邊加入55℃瓊脂糖溶液39ml、凝血酶溶液3.0ml，立即混勻，快速倒入直徑14cm塑料培養(yǎng)皿中，室溫水平放置1小時，打孔。精密量取不同濃度的蚓激酶標準品溶液及供試品溶液各10ml，分別點在同一平皿中，加蓋，置37℃恒溫箱中反應18小時。取出后用卡尺測量溶圈垂直兩直徑，以蚓激酶標準品單位數(shù)

5、的對數(shù)為橫坐標，垂直兩直徑乘積的對數(shù)為縱坐標，計算回歸方程，將供試品垂直兩直徑乘積的對數(shù)代入回歸方程，計算供試品效價單位數(shù)。標準品與供試品應各做兩點，以平均值計算。蛋白含量取本品約20mg，精密稱定，照氮測定法（中國藥典2000年版二部附錄VIID第二法）測定，將結果乘以6.25，即為供試品中蛋白含量，并計算每1mg供試品中的蛋白毫克數(shù)。國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布國家藥典委員會審定比活力按下式計算比活力：每1mg供試品中效價單位數(shù)比活力＝每1mg供試品中蛋白的毫克數(shù)【類別】蛋白水解酶。【貯藏】密封保存。【制劑】蚓激酶腸溶膠囊