蚓激酶活性測(cè)定方法.doc

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1、蚓激酶YinjimeiLumbrokinase本品系人工養(yǎng)殖的赤子愛(ài)勝蚓（EiseniaFoetidaSavigny）中提取制備的一組蛋白水解酶。按干燥品計(jì)算，每1mg效價(jià)應(yīng)不得少于12000單位。每1mg蛋白中蚓激酶比活力不得少于20000單位?！拘誀睢勘酒窞榈S色至黃褐色粉末；味腥，有引濕性。【鑒別】（1）取本品適量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，照分光光度法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄IVA）測(cè)定，在278nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。（2）取本品適量，加0.9％氯化鈉溶液制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；用6號(hào)針頭取動(dòng)物血1滴于試管底部，30

2、分鐘后，加供試品溶液1ml置試管中，輕輕搖動(dòng)，血凝塊應(yīng)在60分鐘內(nèi)溶解。以0.9％氯化鈉溶液1ml為空白，同法操作，血凝塊應(yīng)不溶解?！緳z查】酸堿度取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，依法測(cè)定（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIH），pH值應(yīng)為6.0～8.0。溶液的澄清度與顏色取本品適量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，溶液應(yīng)澄清；如顯色，與黃色2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（中國(guó)藥典2000年版二部附錄IXA第一法）比較，不得更深。干燥失重取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥至恒重，減失重量不得超過(guò)5.0％（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIIIL）?！颈然盍y(cè)定】

3、效價(jià)測(cè)定（1）試劑0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8）取磷酸氫二鈉3.58g，加水使溶解并稀釋至1000ml為A液；取磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）0.78g，加水使溶解并稀釋至500ml為B液；將A、B兩液混合至pH值為7.8。工作溶液取0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8）與0.9％氯化鈉溶液（1:17）混合。1.5%瓊脂糖溶液取瓊脂糖1.5g，加工作溶液100ml加熱溶解。纖維蛋白原溶液取纖維蛋白原適量，加工作溶液制成每1ml中含1.5mg的可凝蛋白溶液。凝血酶溶液取凝血酶，加0.9％氯化鈉溶液制成每1ml中含1BP單位的溶液。（2）標(biāo)準(zhǔn)品

4、溶液的制備取蚓激酶標(biāo)準(zhǔn)品，用0.9％氯化鈉溶液制成濃度分別為每1ml中含10000，8000，6000，4000，2000蚓激酶單位的溶液。（3）供試品溶液的制備取本品適量，加0.9％氯化鈉溶液使溶解并稀釋成標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的濃度。（4）測(cè)定法取纖維蛋白原溶液39ml，置燒杯中，邊攪拌邊加入55℃瓊脂糖溶液39ml、凝血酶溶液3.0ml，立即混勻，快速倒入直徑14cm塑料培養(yǎng)皿中，室溫水平放置1小時(shí)，打孔。精密量取不同濃度的蚓激酶標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液各10ml，分別點(diǎn)在同一平皿中，加蓋，置37℃恒溫箱中反應(yīng)18小時(shí)。取出后用卡尺測(cè)量溶圈垂直兩直徑，以蚓激酶標(biāo)準(zhǔn)品單位數(shù)

5、的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，垂直兩直徑乘積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程，將供試品垂直兩直徑乘積的對(duì)數(shù)代入回歸方程，計(jì)算供試品效價(jià)單位數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)品與供試品應(yīng)各做兩點(diǎn)，以平均值計(jì)算。蛋白含量取本品約20mg，精密稱(chēng)定，照氮測(cè)定法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIID第二法）測(cè)定，將結(jié)果乘以6.25，即為供試品中蛋白含量，并計(jì)算每1mg供試品中的蛋白毫克數(shù)。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布國(guó)家藥典委員會(huì)審定比活力按下式計(jì)算比活力：每1mg供試品中效價(jià)單位數(shù)比活力＝每1mg供試品中蛋白的毫克數(shù)【類(lèi)別】蛋白水解酶?！举A藏】密封保存?！局苿框炯っ改c溶膠囊