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《丙型肝炎病毒抗體膠體金免疫層析法的初步建立.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、EstablishmentofhepatitisCvirusantibodycolloidalgoldimmunochromatography4DissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByQiHongyuanSupervisor：Prof．WangYunlongMay2014摘要丙型肝炎是一種全球性流行的傳染病，目前全球患病率約3％，約有1．8億人感
2、染丙型肝炎病毒(HepatisCVirus，rtcv)，而高度慢性化是該病的最大特征。一般來(lái)說(shuō)，急性HCV感染會(huì)顯示亞臨床狀態(tài)，并導(dǎo)致慢性的肝臟疾病，患者常在無(wú)意識(shí)的情況下延誤治療，從而導(dǎo)致肝硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)生。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)HCV抗病毒特效藥物和相關(guān)疫苗。因此，控制HCV感染的形勢(shì)十分嚴(yán)峻。目前主要靠早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療來(lái)防控HCV傳染源、阻斷傳播途徑，這對(duì)HCV的診斷提出較高要求?，F(xiàn)在HCV的前期篩檢主要為檢測(cè)血清中的抗體，主要方法包括：酶聯(lián)免疫法、聚合酶鏈反應(yīng)、重組免疫印跡等。膠體金免疫層析方法與之相比，操作簡(jiǎn)單、攜帶方便、快速、特異，不需要任何設(shè)備和特殊
3、試劑即可得到檢測(cè)結(jié)果，特別適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和診斷。本課題基于膠體金的性質(zhì)及免疫學(xué)原理，研制了一種能夠快速診斷HCV抗體的膠體金免疫層析試紙條。即利用免疫膠體金技術(shù)，選擇使用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，然后用其標(biāo)記HCV重組抗原制備成金墊，同時(shí)將包被抗原與HCV單抗分別作為檢測(cè)線與質(zhì)控線蛋白包被硝酸纖維素膜，用于血清中HCV抗體的檢測(cè)。為制備出特異性、靈敏度、穩(wěn)定性俱佳的試紙條，在研究過(guò)程中，充分考慮了各種影響因素對(duì)試紙條品質(zhì)的影響。通過(guò)對(duì)膠體金制備用水、重組抗原的標(biāo)記濃度、標(biāo)記pH值、包被抗原抗體濃度、不同硝酸纖維素膜、不同濕度環(huán)境下對(duì)包被的影響、不同粒徑大小的膠體
4、金的靈敏度差異等因素進(jìn)行摸索與探究，最終確定選擇超純水制備粒徑大小約40nl'll的膠體金，標(biāo)記蛋白濃度為20¨g／mL，采用SartoriusstedimCNl40無(wú)背襯膜在40％．60％的環(huán)境濕度下，質(zhì)控線和檢測(cè)線分別包被HCV單抗1mg／mL和HCV重組抗原1．5mg／mL，建立HCV膠體金雙抗原夾心法。對(duì)制備的試紙條進(jìn)行特異性、靈敏度、穩(wěn)定性等方面系統(tǒng)檢測(cè)，并與ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行臨床比較。結(jié)果表明該免疫膠體金試紙條特異性、靈敏度、穩(wěn)定性較好，并方便、快捷，與ELISA法檢測(cè)對(duì)比陽(yáng)性率與陰性率俱佳?？捎糜诒尾《靖腥镜脑缙谠\斷，具有一定的臨床使用價(jià)值。關(guān)
5、鍵詞：膠體金，雙抗原夾心，免疫層析，丙型肝炎病毒AbstractHepatitisCisaglobalepidemicofinfectiousdiseases．theprevalencerateofabout3％．About180000000peopleareinfectedwithHCV,andtheheightofthechronicityisthebiggestcharacteristicofthedisease．Ingeneral，acuteHCVinfectionwilldisplaythesubclinicalstate，andleadtochroni
6、cliverdisease．Patientsoftendelaytreatmentinthecaseoftheunconscious，whichleadstotheoccurrenceofhepatoeellularcarcinomaandlivercirrhosis．AndthereisnoHCVeffectsofantiviraldrugsandvaccines．Therefore，controlofHCVinfectionsituationisgrim．Whiletheearlydiscovery,earlydiagnosisandearlytreatmen
7、tarethesourceofinfection．PreventionandcontrolofHCVinterrupttransmissionofthemosteffectivemeanstothediagnosisofHCV,whichputforwardhigherrequirements．Atpresent，theHCVscreeningforantibodydetectioninserum，themainmethodsinclude：enzymelinkedimmunosorbentassay,polymerasechainreaction，recombi
8、nanti
