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《膠體金免疫層析法快速檢測(cè)牛奶、奶粉、飼料中的三聚氰胺.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第41卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報(bào)告第7期2013年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1025～l030DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．20972膠體金免疫層析法快速檢測(cè)牛奶、奶粉、飼料中的三聚氰胺李淑群曹碧云常化仿鄧安平(蘇州大學(xué)材料與化學(xué)化工學(xué)部，蘇州215123)摘要建立了快速檢測(cè)牛奶、奶粉、飼料樣品中三聚氰胺的膠體金免疫層析分析法。將三聚氰胺進(jìn)行分子修飾得到兩種衍生物，分別與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)相連制得免疫原和包被抗原。運(yùn)用雜交瘤抗體制備技術(shù)得到
2、抗三聚氰胺的單克隆抗體(mAb)。利用檸檬酸三鈉還原法制得平均粒徑18nm的膠體金，將膠體金與抗三聚氰胺單克隆抗體相連，所形成的金標(biāo)抗體(Au·mAb)包被在膠體金墊上，包被抗原和羊抗鼠二抗分別包被在硝酸纖維素膜(NC)上作為檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)。將膠金墊、NC膜、樣品墊和吸水紙組裝成免疫層析快速檢測(cè)試劑條。將標(biāo)準(zhǔn)溶液(或待測(cè)液)滴加到樣品墊上，10rain后可在NC膜C線和T線位置上用肉眼觀察到膠體金的顏色(紅色)，通過比對(duì)顏色的深淺判斷樣品中三聚氰胺的含量。結(jié)果表明，三聚氰胺的檢出限為1OL；選用了其它10種物質(zhì)對(duì)免疫層析試劑條進(jìn)行了特異
3、性實(shí)驗(yàn)，免疫層析試劑條與2一氯4，6一二氨基一1，3，5-三嗪和環(huán)丙氨嗪的交叉反應(yīng)率約為1％，與其它8種物質(zhì)沒有交叉反應(yīng)；力口標(biāo)樣品用免疫層析試劑條和酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)同時(shí)檢查，結(jié)果一致。本方法適用于牛奶、奶粉、飼料樣品中三聚氰胺的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。關(guān)鍵詞三聚氰胺；單克隆抗體；膠體金；免疫層析法1引言三聚氰胺(Melamine，圖1a)，化學(xué)名為2，4，6-三氨基．1，3，5．三嗪，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，主要用作生產(chǎn)三聚氰胺甲醛樹脂的原料，這種樹脂被廣泛運(yùn)用于木材、塑料、造紙、紡織、皮革等行業(yè)；三聚氰胺還可以作阻燃劑、減水劑、甲醛清
4、潔劑等?。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而常規(guī)的“凱氏定氮法”檢測(cè)食品或飼料中蛋白質(zhì)含量時(shí)不能排除這類“偽蛋白氮”的干擾，因而一些不法分子為降低成本，在牛奶、奶粉和飼料添加這種非食品性化工原料，以提高其產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量。2008年lO月，我國制定了乳品中三聚氰胺管理限量值，嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為1mg／kg；含乳15％以上的其它食品中三聚氰胺的限量值為2．5mg／kg。目前，檢測(cè)三聚氰胺的主要方法有氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法(GC—MS)[2,3J、高效液相色譜法(HPLC)E4-6]、液相色譜．質(zhì)譜聯(lián)用法(LC—MS)E7J，這些方法雖然
5、準(zhǔn)確度高，但樣品預(yù)處理復(fù)雜、設(shè)備昂貴，檢測(cè)費(fèi)用高。近年來，酶聯(lián)免疫吸附法以及膠體免疫層析試劑條¨H等已用于三聚氰胺的檢測(cè)，但仍存在靈敏度不夠高或特異性不夠強(qiáng)等不足。本研究對(duì)三聚氰胺的分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行了較合理的修飾，合成了兩種三聚氰胺衍生物，并分別與牛血清白蛋白和雞卵清白蛋白相連制得免疫原和包被抗原。利用雜交瘤抗體制備技術(shù)得到抗三聚氰胺的單克隆抗體，以所制得的抗體為基礎(chǔ)，建立了測(cè)定牛奶、奶粉、飼料中三聚氰胺的膠體金免疫層析法。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與試劑UV．2300型紫外?？梢姺止夤舛扔?jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司)；Dura12FV純水機(jī)(美國THELAB公
6、司)；SunriseRemote酶標(biāo)儀和M12／2R洗板機(jī)(奧地利Teean公司)；硝酸纖維素膜(Whatman公司)，底板，吸水紙，玻璃纖維素膜(上海杰一生物有限公司)；三聚氰胺(成都長(zhǎng)征化學(xué)試劑有限公司)；2012-09-26收稿；2013-01—22接受本文系國家自然科學(xué)基金(No．21175097)資助E-mail：denganping@suda．edu．ca分析化學(xué)第41卷檸檬酸三鈉，氯金酸，二甲亞砜(上海國藥有限公司)；牛血清白蛋白(Bovineserumalbumin，BSA)、雞卵清白蛋白(Ovalbumin，OVA)、酪蛋白、3，3，
7、5，5．四甲基聯(lián)苯胺(3，3，5，5，．tetramethylbenzne，TMB)、二環(huán)己基碳二亞胺(／、r，N—dicyclohexylcarbodiimide，DCC)、N一羥基琥珀酰亞胺(N—hydroxysucci—nimide，NHS)和二甲基甲酰胺(Dimethylf0rmamide，DMF)均購自美國Sigma公司；羊抗鼠IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；2一氯4，6一二氨基一1，3，5．三嗪(2一Chloro-4，6-diamino．1，3，5-triazine，CAAT，比利時(shí)AcrosOrganics公司)；三聚氰酸、三聚氰
8、氯(上海國藥有限公司)；環(huán)丙氨嗪(浙江國邦醫(yī)藥有限公司)；阿特拉津(浙江中山化工有限公司)。其
