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1、失活作用:通過變性作用引起酶活力下降或喪失抑制作用:改變必需基團性質(zhì),引起酶活力下降,喪失第一節(jié)抑制作用的類型:一、分類:(一)不可逆抑制作用:抑制劑以很牢固的共價鍵與酶結(jié)合，不能用物理方法除去，抑制后酶活力不能恢復?專一性的不可逆抑制劑:?非專一性的不可逆抑制劑:(二)可逆抑制作用:抑制劑以非共價鍵與酶結(jié)合阻遏酶的活性，可以用物理方法除去抑制劑后，酶活力能恢復二、區(qū)別方法(一)物理方法:(二)動力學方法:1.酶預先用抑制劑處理后測定酶活力變化情況:2.在測活系統(tǒng)中加入抑制劑,然后加入不同酶量,測定酶活力變化情況:第二節(jié)不可逆抑制作用一.非專一性的不可逆抑制作用:1.概念:2.非專一
2、性的不可逆抑制劑?酰化試劑:(酸酐,乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯,O-甲基異脲)--NH2－NH－CO-RR-CO-X+E---OH??E-－O－CO-R+HX--C6H5-OH－C6H5-O－CO-R--SH－S－CO-R?烷化試劑:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸,碘代乙酰胺等)-NH3-NH-R-SH-S-RR-X+E-COOH??E－-COOR+HX-S-CH3-S?(CH3)-R咪唑基NH-咪唑基N-R?含有活潑雙鍵試劑:(N-乙基順丁烯二酸抱亞胺(NEMI)、丙烯腈等OONH2NHN-CH-CH23N-CH2-CH3+EOOOSHSN-CH2-CH3O?親電試劑:(四硝基甲烷
3、(TNM)NO2NO2O2NCNO2+E--OHE--OH+CH(NO2)3?氧化劑:H2O2,NBS等NO2作用-SH、Trp、吲哚基等?還原劑:ME,DTT等,作用-S-S-、二、專一性不可逆抑制劑:（一）Ks型不可逆抑制劑:1.概念2.抑制機理E+I?EI?EInE＋IEIEin親和標記法圖解判斷Ks型抑制劑作用是否發(fā)生在活性部位方法:?化學定量法.?底物、競爭性抑制劑保護方法?酶先可逆失活,再研究KS型抑制情況（二）Kcat型不可逆抑制動力學概念:自殺性底物例如中E.coli中?-羥基葵酰硫酯脫水酶CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO-S-RR=-CH2-CH2-
4、NH-CO-CH3CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R(?-?反式雙鍵)CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R(?,?順式雙鍵)Kcat型抑制劑:3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺CH3-(CH2)5-C?C-CH2-CO-S-RECH3-(CH2)5HC=C=CH-CO-SRNENHCH3(CH2)5HC=C-CH2-CO-SRNN不可逆共價結(jié)合第三節(jié)可逆抑制作用的動力學:可逆抑制作用:ReversibleInhibition1.概念2.類型:競爭性抑制:Comp.CCompetitiveinhibition非競爭性抑制NonC.NCNon-Competitiv
5、e反競爭性抑制UnC.UCUn-Competitive混合型抑制MTMixedTypeinhibition一、競爭性抑制作用動力學模型圖:競爭性抑制作用動力學方程推導：I+k1k2k2E+SESE+Pk-1k1[S]EESk-1k-3k3k-3k3[I]EIEI酶形式矢量圖動力學項Ek-1k-3+k-3k2ESk1k-3[S]EIk-1k3[I]+k2k3[I]vk[ES]kkk[S]0221?3??[E][E]k(k?k)?kk[S]?k(k?k)[I]0t?3?12?313?12k[E][S]V[S]20mv??0(k?k)k(k?k)[I]?123?12K(1?)?[S]?[S
6、]??[I]mkkkK1?31I動力學模型:I+Kmk2E+SESE+PKIEI動力學方程：V[S]mv?[I]k?3[I]K(1?)?[S]KI?Kmapp?Km(1?)mk3KKII式中Vm=k2[E]o不變Km為米氏常數(shù)Kmapp表觀米氏常數(shù)，增大KI為抑制常數(shù)雙倒數(shù)作圖法：1?Km(1?[I])?1?1VVmKI[S]Vm1441232.0-1)in1021.5/m18Dm0(OK1.06/v140.520.00.00.30.60.91.2-2.0-1.00.01.02.03.04.0[I](mM)-11/[S](mM)抑制常數(shù)：KI的求法：KK[I]KKmImapp?m(1
7、?)?m?[]KIKI以Kmapp對[I]作圖，橫軸截距為-KI[I]??100%抑制率i%=(1-vi/vo)?100%KI(1?[S]/Km)?[I]i%與[S]有關(guān),[S]?i%?二、非競爭性抑制作用動力學:II++k2動力學模型:E+SESE+PKIKIEI+SESIVm?[S]Vm?[S]動力學方程：?v??[I][I][I]Km?[S]?Km???[S](Km?[S])(1?)KIKIKIVmapp?[S]Vm?Vmapp?[I]Km?[S](
