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《款冬花中抑制肺癌細胞LA795增殖的活性成分研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第48卷第1期復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版)Vol.48No.12009年2月JournalofFudanUniversity(NaturalScience)Feb.2009文章編號:042727104(2009)0120125205款冬花中抑制肺癌細胞LA795增殖的活性成分研究1112劉可越,劉海軍,吳家忠,張鐵軍(1.九江學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,江西332000;2.天津藥物研究院,天津300193)摘要:分析研究了款冬花中具有抑制肺癌細胞增殖的活性成分.以小鼠肺腺癌LA795細胞為體外抑瘤篩選模型,利用四甲基偶
2、氮唑鹽(MTT)比色法,結(jié)合硅膠柱色譜,SephadexLH220,PHPLC等手段追蹤分離款冬花抗肺癌的活性成分.并通過理化和波譜分析方法鑒定了單體化合物的結(jié)構(gòu).它們分別是:1,22di2(3′,4′2dihydroxycinnamoyl)2cychopenta232ol,(Ⅰ)、蘆丁(Rutin,Ⅱ)、山奈酚(Kaemferol,Ⅲ)、槲皮素(Quercetin,Ⅳ)、異槲皮苷(Isoquercitrin,Ⅴ).其中(Ⅰ)為新化合物,化合物(Ⅴ)為首次從款冬花中分離得到.并采用MTT法對分得的化合物
3、進行抑制LA795細胞株增殖作用的研究,用半數(shù)抑制濃度(IC)評價其抗腫瘤活性.結(jié)果表明化合物Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ對小鼠肺腺癌細胞LA795的增殖都顯示出一定的抑制作用.其中化合物Ⅰ和Ⅳ抑瘤作用較顯著.IC50分別為125.2和83.2μg/mL.這些化合物抗肺癌細胞增殖活性為款冬花中首次發(fā)現(xiàn).關(guān)鍵詞:款冬花;肺癌;1,22di2(3′,4′2dihydroxycinnamoyl)2cychopenta232ol;槲皮素中圖分類號:R284.1;R284.5文獻標志碼:A肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一,近20年來
4、,其病死率在惡性腫瘤中上升幅度最大,已居首位.中醫(yī)藥是我國治療肺癌的特色療法,近年來應(yīng)用辨證論治、專方專藥治療肺癌均有一定的進展,在穩(wěn)定病[1]灶、改善癥狀、提高生存質(zhì)量等方面具有較大的優(yōu)勢.筆者經(jīng)文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn),諸多醫(yī)學(xué)名著記載中藥款[225]冬花可用于治療肺癌,尤擅治療肺腺癌.款冬花(TussilagofarfaraL.)為菊科款冬屬植物款冬的干燥花蕾.《本草綱目》中記載其性溫、味辛,主[6]治咳逆上氣善喘,肺痿肺癰,吐膿血等癥.現(xiàn)在我國亦有很多中醫(yī)名家將款冬花入復(fù)方治療肺癌,但由于缺乏對款冬花抗肺癌
5、的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的系統(tǒng)研究,即具體是哪些成分能有效的治療肺癌尚未明確,這嚴重影響了款冬花臨床上的推廣使用,并且其活性成分不明確也成為制約款冬花進入國際藥品市場的瓶頸問題.因此本實驗以研究款冬花中抗肺癌細胞增殖的活性成分為主要目的,運用化學(xué)分離與藥理活性追蹤相結(jié)合的方法,以肺腺癌LA795細胞為體外抑瘤篩選模型,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法作為抗腫瘤活性測定方法,利用硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜等分離手段對款冬花的抗肺癌活性成分進行系統(tǒng)分離,并利用MTT法以IC50為指標對分得化合物進行了抑制肺腺癌LA
6、795細胞增殖的活性研究.1儀器與材料X4顯微熔點測定儀;NicoletImapact410型紅外光譜儀;BrukerAV2400核磁共振儀(TMS為內(nèi)標);HP5973NMSD型質(zhì)譜儀;Bio2Rad3550型酶標儀.薄層色譜和柱色譜用硅膠為青島海洋化工廠出品,柱層析用SephadexLH220為Pharmacia公司產(chǎn)品,上海化學(xué)試劑廠進口分裝;52氟尿嘧啶注射液(52FU,上海旭東海普藥業(yè)有限公司,批號050615).胎牛血清(杭州四季青牛物工程材料公司產(chǎn)品),RPM11640和胰蛋自酶(美國GI
7、BCO公司).款冬花藥材購自河北安國中藥材市場,由天津藥物研究院張鐵軍研究員鑒定.收稿日期:2008207207基金項目:天津市科技計劃發(fā)展資助項目(043180911)作者簡介:劉可越(1978—),女,博士,副教授,E2mail:elliee12345@yahoo.com.cn.126復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版)第48卷2提取與分離10kg干燥的款冬花藥材,粉碎后用85%乙醇回流提取2次,每次3h.合并提取液,減壓回收溶劑,得粗提物.將粗提物懸浮于水中,依次以石油醚、醋酸乙酯、水飽和正丁醇萃取,濃縮干燥得
8、各萃取部位浸膏.采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法),進行抑制肺癌細胞LA795增殖的活性測試,結(jié)果表明正丁醇萃取部位顯示較好活性.所以對其進行活性追蹤分離.取正丁醇萃取物60g經(jīng)硅膠柱色譜層析,分別以氯仿-甲醇梯度(V氯仿∶V甲醇=95∶5,10∶1,7∶1,5∶1,3∶1,2∶1)洗脫,得到Fr.1～6餾分.活性測試表明Fr.2,Fr.3,Fr.5具有較好的體外抑瘤活性.因此對以上三部分繼續(xù)追蹤分離.Fr.3(V氯仿∶V甲醇=7∶1)餾
