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《款冬花中抑制肺癌細(xì)胞LA795增殖的活性成分研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第48卷第1期復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vol.48No.12009年2月JournalofFudanUniversity(NaturalScience)Feb.2009文章編號(hào):042727104(2009)0120125205款冬花中抑制肺癌細(xì)胞LA795增殖的活性成分研究1112劉可越,劉海軍,吳家忠,張鐵軍(1.九江學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,江西332000;2.天津藥物研究院,天津300193)摘要:分析研究了款冬花中具有抑制肺癌細(xì)胞增殖的活性成分.以小鼠肺腺癌LA795細(xì)胞為體外抑瘤篩選模型,利用四甲基偶
2、氮唑鹽(MTT)比色法,結(jié)合硅膠柱色譜,SephadexLH220,PHPLC等手段追蹤分離款冬花抗肺癌的活性成分.并通過(guò)理化和波譜分析方法鑒定了單體化合物的結(jié)構(gòu).它們分別是:1,22di2(3′,4′2dihydroxycinnamoyl)2cychopenta232ol,(Ⅰ)、蘆丁(Rutin,Ⅱ)、山奈酚(Kaemferol,Ⅲ)、槲皮素(Quercetin,Ⅳ)、異槲皮苷(Isoquercitrin,Ⅴ).其中(Ⅰ)為新化合物,化合物(Ⅴ)為首次從款冬花中分離得到.并采用MTT法對(duì)分得的化合物
3、進(jìn)行抑制LA795細(xì)胞株增殖作用的研究,用半數(shù)抑制濃度(IC)評(píng)價(jià)其抗腫瘤活性.結(jié)果表明化合物Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ對(duì)小鼠肺腺癌細(xì)胞LA795的增殖都顯示出一定的抑制作用.其中化合物Ⅰ和Ⅳ抑瘤作用較顯著.IC50分別為125.2和83.2μg/mL.這些化合物抗肺癌細(xì)胞增殖活性為款冬花中首次發(fā)現(xiàn).關(guān)鍵詞:款冬花;肺癌;1,22di2(3′,4′2dihydroxycinnamoyl)2cychopenta232ol;槲皮素中圖分類號(hào):R284.1;R284.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A肺癌是臨床最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,近20年來(lái)
4、,其病死率在惡性腫瘤中上升幅度最大,已居首位.中醫(yī)藥是我國(guó)治療肺癌的特色療法,近年來(lái)應(yīng)用辨證論治、專方專藥治療肺癌均有一定的進(jìn)展,在穩(wěn)定病[1]灶、改善癥狀、提高生存質(zhì)量等方面具有較大的優(yōu)勢(shì).筆者經(jīng)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn),諸多醫(yī)學(xué)名著記載中藥款[225]冬花可用于治療肺癌,尤擅治療肺腺癌.款冬花(TussilagofarfaraL.)為菊科款冬屬植物款冬的干燥花蕾.《本草綱目》中記載其性溫、味辛,主[6]治咳逆上氣善喘,肺痿肺癰,吐膿血等癥.現(xiàn)在我國(guó)亦有很多中醫(yī)名家將款冬花入復(fù)方治療肺癌,但由于缺乏對(duì)款冬花抗肺癌
5、的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的系統(tǒng)研究,即具體是哪些成分能有效的治療肺癌尚未明確,這嚴(yán)重影響了款冬花臨床上的推廣使用,并且其活性成分不明確也成為制約款冬花進(jìn)入國(guó)際藥品市場(chǎng)的瓶頸問(wèn)題.因此本實(shí)驗(yàn)以研究款冬花中抗肺癌細(xì)胞增殖的活性成分為主要目的,運(yùn)用化學(xué)分離與藥理活性追蹤相結(jié)合的方法,以肺腺癌LA795細(xì)胞為體外抑瘤篩選模型,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法作為抗腫瘤活性測(cè)定方法,利用硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜等分離手段對(duì)款冬花的抗肺癌活性成分進(jìn)行系統(tǒng)分離,并利用MTT法以IC50為指標(biāo)對(duì)分得化合物進(jìn)行了抑制肺腺癌LA
6、795細(xì)胞增殖的活性研究.1儀器與材料X4顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀;NicoletImapact410型紅外光譜儀;BrukerAV2400核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo));HP5973NMSD型質(zhì)譜儀;Bio2Rad3550型酶標(biāo)儀.薄層色譜和柱色譜用硅膠為青島海洋化工廠出品,柱層析用SephadexLH220為Pharmacia公司產(chǎn)品,上?；瘜W(xué)試劑廠進(jìn)口分裝;52氟尿嘧啶注射液(52FU,上海旭東海普藥業(yè)有限公司,批號(hào)050615).胎牛血清(杭州四季青牛物工程材料公司產(chǎn)品),RPM11640和胰蛋自酶(美國(guó)GI
7、BCO公司).款冬花藥材購(gòu)自河北安國(guó)中藥材市場(chǎng),由天津藥物研究院張鐵軍研究員鑒定.收稿日期:2008207207基金項(xiàng)目:天津市科技計(jì)劃發(fā)展資助項(xiàng)目(043180911)作者簡(jiǎn)介:劉可越(1978—),女,博士,副教授,E2mail:elliee12345@yahoo.com.cn.126復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)第48卷2提取與分離10kg干燥的款冬花藥材,粉碎后用85%乙醇回流提取2次,每次3h.合并提取液,減壓回收溶劑,得粗提物.將粗提物懸浮于水中,依次以石油醚、醋酸乙酯、水飽和正丁醇萃取,濃縮干燥得
8、各萃取部位浸膏.采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法),進(jìn)行抑制肺癌細(xì)胞LA795增殖的活性測(cè)試,結(jié)果表明正丁醇萃取部位顯示較好活性.所以對(duì)其進(jìn)行活性追蹤分離.取正丁醇萃取物60g經(jīng)硅膠柱色譜層析,分別以氯仿-甲醇梯度(V氯仿∶V甲醇=95∶5,10∶1,7∶1,5∶1,3∶1,2∶1)洗脫,得到Fr.1～6餾分.活性測(cè)試表明Fr.2,Fr.3,Fr.5具有較好的體外抑瘤活性.因此對(duì)以上三部分繼續(xù)追蹤分離.Fr.3(V氯仿∶V甲醇=7∶1)餾
