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1、鎘對小鼠肝臟毒性作用的實驗觀察（綜合設(shè)計實驗）鎘對小鼠肝臟毒性作用的實驗觀察?一、????????????實驗研究依據(jù)實驗?zāi)康呐c意義肝臟是鎘急性中毒損傷的主要靶器官之一。鼠急性中毒后，鎘主要蓄積于肝臟。有文獻報道，鎘有很強的親硫性。在肝臟中，鎘易與巰基結(jié)合從而誘導(dǎo)金屬硫蛋白生成鎘一硫蛋白【1】，因而金屬硫蛋白對急性鎘中毒有應(yīng)急保護作用【2】，但若鎘在短期內(nèi)大量轉(zhuǎn)運到肝臟，便導(dǎo)致肝內(nèi)金屬硫蛋白相對不足，不能與鎘有效結(jié)合而引起肝功能障礙，這可能是鎘引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一。【3】有研究發(fā)現(xiàn)，染鎘后，從外觀上看，小
2、鼠肝臟體積腫大，肝葉腫脹明顯，肝葉間有粘連、邊緣變鈍，顏色紫黑，質(zhì)地變硬?！?】鏡下肝實質(zhì)細胞的腫脹、嗜酸性變、淋巴細胞浸潤及核固縮等肝細胞損傷改變。????????本研究通過動物實驗，了解鎘對小鼠肝臟的毒性作用，并從氧化應(yīng)激方面探討其作用機制。二、????????????實驗內(nèi)容與方法(1)、實驗動物：健康成年清潔級昆明種小鼠40只，雌雄各半。(2)、主要試劑與儀器：l??儀器：7230分光光度計；顯徽鏡；分析天平；SIGMA2K15型冷凍高速離心機；l??試劑：氯化鎘?(CdCI2，A．R．)、HNO3-HClO4、蒸餾水、生理
3、鹽水(3)、動物分組與染毒：體重?18—25g的健康成年清潔級昆明種小鼠隨機區(qū)組分為4組，每組10只，雌雄各辦臨用前以生理鹽水配制CdCI2溶液，CdCI2染毒劑量分別為0.5、?1.0、?2.0mg/kg，染毒組小鼠皮下注射氯化鎘溶液(10ml／kg體重)，對照組注射生理鹽水?(10ml／kg體重)，連續(xù)染毒三天。各組小鼠最后一次染毒24小時后摘眼球采血或斷頭取全血，4°下用3000r/min離心10分鐘制備血清。小鼠處死后迅速摘出肝臟，生理鹽水洗凈、吸干、稱重。血清用于AST、ALT生化指標(biāo)測定，取部分肝臟用于SOD、MDA測定
4、。?三、????????????觀察指標(biāo)1．?????????????AST、ALT活性的測定：AST、ALT檢測試劑盒，比色法。2．????????????MDA測定采用：硫代巴比妥酸(TBA)法．以?1,1,3,3—四乙氧基丙烷?(TEP)為標(biāo)準，單位以每克蛋白中與TBA反應(yīng)物(TBARS)的μmol數(shù)表示。蛋白質(zhì)測定采用Lowry法，以小牛血清白蛋白為標(biāo)準；MDA檢測試劑盒，比色法。3．????????????SOD測定：SOD檢測試劑盒，比色法。4．????????????肝重、體重、臟器系數(shù)：稱重法。5．?????????
5、???肝勻漿蛋白質(zhì)測定：考馬氏亮藍比色法?四、????????????數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法???????各組檢測指標(biāo)計算均數(shù)、標(biāo)準差，數(shù)據(jù)各組間比較采用F檢驗。五、????????????預(yù)期實驗結(jié)果1、隨著CdCI2濃度的增長，AST、ALT的活性升高，提示鎘對肝臟組織的損傷作用。2、MDA測定的反應(yīng)物TBARS與CdCI2的染毒濃度呈正相關(guān)，且有效應(yīng)劑量關(guān)系。?文獻資料：【1】?????劉杰.用轉(zhuǎn)基因動物研究金屬硫蛋白對鎘毒性的左右[J].中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志，1998,16(1):43.【2】????金慧英.急性鎘中毒的肝臟損傷
6、機制及金屬硫蛋白的保護作用[J].中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志,1998,16(1):43.【3】????陳敏，等.鎘對小鼠肝臟的毒作用機理探討[J].江蘇大學(xué)學(xué)報?(醫(yī)學(xué)版)，August2002,12(4).【4】????XieJM,FunakoshiT,ShimadaH,etal.Comparativeeffectsofchelatingagentsinpulmonarytoxicityofsystemicnickelinmice[J].JApplToxicol,1996,16:317.【5】????謝吉民，胡繼岳，朱衛(wèi)華.等.新型
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