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1、鎘對(duì)小鼠肝臟毒性作用的實(shí)驗(yàn)觀察（綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)）鎘對(duì)小鼠肝臟毒性作用的實(shí)驗(yàn)觀察?一、????????????實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c意義肝臟是鎘急性中毒損傷的主要靶器官之一。鼠急性中毒后，鎘主要蓄積于肝臟。有文獻(xiàn)報(bào)道，鎘有很強(qiáng)的親硫性。在肝臟中，鎘易與巰基結(jié)合從而誘導(dǎo)金屬硫蛋白生成鎘一硫蛋白【1】，因而金屬硫蛋白對(duì)急性鎘中毒有應(yīng)急保護(hù)作用【2】，但若鎘在短期內(nèi)大量轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，便導(dǎo)致肝內(nèi)金屬硫蛋白相對(duì)不足，不能與鎘有效結(jié)合而引起肝功能障礙，這可能是鎘引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一。【3】有研究發(fā)現(xiàn)，染鎘后，從外觀上看，小
2、鼠肝臟體積腫大，肝葉腫脹明顯，肝葉間有粘連、邊緣變鈍，顏色紫黑，質(zhì)地變硬?！?】鏡下肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的腫脹、嗜酸性變、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及核固縮等肝細(xì)胞損傷改變。????????本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，了解鎘對(duì)小鼠肝臟的毒性作用，并從氧化應(yīng)激方面探討其作用機(jī)制。二、????????????實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法(1)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康成年清潔級(jí)昆明種小鼠40只，雌雄各半。(2)、主要試劑與儀器：l??儀器：7230分光光度計(jì)；顯徽鏡；分析天平；SIGMA2K15型冷凍高速離心機(jī)；l??試劑：氯化鎘?(CdCI2，A．R．)、HNO3-HClO4、蒸餾水、生理
3、鹽水(3)、動(dòng)物分組與染毒：體重?18—25g的健康成年清潔級(jí)昆明種小鼠隨機(jī)區(qū)組分為4組，每組10只，雌雄各辦臨用前以生理鹽水配制CdCI2溶液，CdCI2染毒劑量分別為0.5、?1.0、?2.0mg/kg，染毒組小鼠皮下注射氯化鎘溶液(10ml／kg體重)，對(duì)照組注射生理鹽水?(10ml／kg體重)，連續(xù)染毒三天。各組小鼠最后一次染毒24小時(shí)后摘眼球采血或斷頭取全血，4°下用3000r/min離心10分鐘制備血清。小鼠處死后迅速摘出肝臟，生理鹽水洗凈、吸干、稱重。血清用于AST、ALT生化指標(biāo)測(cè)定，取部分肝臟用于SOD、MDA測(cè)定
4、。?三、????????????觀察指標(biāo)1．?????????????AST、ALT活性的測(cè)定：AST、ALT檢測(cè)試劑盒，比色法。2．????????????MDA測(cè)定采用：硫代巴比妥酸(TBA)法．以?1,1,3,3—四乙氧基丙烷?(TEP)為標(biāo)準(zhǔn)，單位以每克蛋白中與TBA反應(yīng)物(TBARS)的μmol數(shù)表示。蛋白質(zhì)測(cè)定采用Lowry法，以小牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)；MDA檢測(cè)試劑盒，比色法。3．????????????SOD測(cè)定：SOD檢測(cè)試劑盒，比色法。4．????????????肝重、體重、臟器系數(shù)：稱重法。5．?????????
5、???肝勻漿蛋白質(zhì)測(cè)定：考馬氏亮藍(lán)比色法?四、????????????數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法???????各組檢測(cè)指標(biāo)計(jì)算均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)各組間比較采用F檢驗(yàn)。五、????????????預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、隨著CdCI2濃度的增長(zhǎng)，AST、ALT的活性升高，提示鎘對(duì)肝臟組織的損傷作用。2、MDA測(cè)定的反應(yīng)物TBARS與CdCI2的染毒濃度呈正相關(guān)，且有效應(yīng)劑量關(guān)系。?文獻(xiàn)資料：【1】?????劉杰.用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究金屬硫蛋白對(duì)鎘毒性的左右[J].中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志，1998,16(1):43.【2】????金慧英.急性鎘中毒的肝臟損傷
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