黃芩苷抑制肝癌HepG-2細胞增殖實驗探究.doc

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1、黃苓昔抑制肝癌HepG-2細胞增殖實驗探究作者:張學武崔長旭陳麗艷全吉淑【摘要】目的觀察黃苓昔對肝癌HepG-2細胞增殖的影響。方法采用MTT比色法觀察黃苓昔抑制肝癌HepG-2細胞增殖;采用流式細胞儀檢測黃苓昔對HepG-2細胞周期分布的影響。結果黃苓昔可抑制肝癌HepG-2細胞增殖,其作用具有時間和濃度依賴性;黃苓昔可誘導細胞凋亡,同時改變細胞周期分布,多數細胞阻滯于S期,與對照組比較,細胞凋亡率差異有顯著性。結論黃苓昔可誘導肝癌HepG-2細胞凋亡,改變細胞周期分布,從而抑制細胞增殖?!娟P鍵詞】黃苓昔細胞周期細胞凋亡Abstract:ObjectiveToinvest

2、igatetheinhibitionofbaicalinonproliferationhepatomaHepG~2cells?MethodsMTTassaywasusedtoexaminetheeffectofbaicalinontheproliferationofHepG~2cellandf1owcytometrywasusedforthecellcycledistribution.ResultsBaicalininhibitedtheproliferationofHepG-2cellandtheeffectswereinatime-and-concentrationde

3、pendentmanner?Baicalincouldalsoinduceapoptosis,theSphasewasarrestedandtheratioofapoptosistherewassignificantdifferencethanthatofcontrolgroup,respectively.ConclusionBaicalininhibitsproliferationofHepG~2cellsviainductionofapoptosisandcellcyclearrest.Keywords:Baicalin;Cellcycle;Apoptosis黃苓為唇形

4、科(Labiatae)植物黃苓ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根,是常用中藥。性寒、味苦,歸肺、心、肝、膽、大腸經,具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。黃苓的主要成分是黃酮和黃酮醇、二氫黃酮和二氫黃酮醇、苯乙醇糖昔、揮發(fā)油以及葡萄糖、蔗糖、苯甲酸、B-谷笛醇、豆笛醇、菜油笛醇和苯甲醇等。其中,屬于黃酮類化合物的黃苓<(Baicalin)作為黃苓的最主要有效成分,在黃苓根中含量為9%~14%。近年來,隨著對黃苓昔的深入研究,發(fā)現(xiàn)黃苓昔具有抗菌、抗病毒、抗感染、抗HIV、抗氧化及清除氧自由基和治療心血管疾病等作用。本實驗選用肝癌HepG-2細

5、胞株作為研究對象,研究黃苓昔對肝癌HepG-2細胞增殖的作用以及黃苓昔對細胞周期分布和凋亡的影響。1材料與儀器1.1細胞株HepG-2細胞購于南京凱基生物技術公司。1.2藥物試劑黃苓昔購于南京青澤醫(yī)藥有限公司。嗟哩蘭購自美國Sigma公司;RPMI1640培養(yǎng)基購自美國GIBCO公司;小牛血清購自北京華美生物工程公司;胰蛋白酶購自美國DIFCO公司;鼠抗bcl-2、p53單克隆抗體購自福州邁新生物有限公司。1.3儀器OLYMPUS倒置顯微鏡購自日本;RT-2100型酶標儀購自美國;FACSCalibur流式細胞儀購自美國;JEM-1200EX透射電子顯微鏡購自日本;PD-2

6、000真彩色病理細胞圖像分析儀購自北京天地百年科技公司。2方法2.1HepG-2細胞培養(yǎng)肝癌HepG-2細胞貼壁生長,培養(yǎng)于含10%滅活小牛血清,含100U/ml青霉素及100U/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中,置37°C、相對濕度90%、5%C02孵箱內培養(yǎng)。2.2HepG-2細胞形態(tài)的變化取對數生長期HepG-2細胞按每瓶1X105個細胞接種于96孔細胞培養(yǎng)板中,24h后換液,加入含不同濃度(25,50,100ug/ml)黃苓昔的10%新生小牛血清RPMI1640培養(yǎng)液200ul,另設終濃度為25Ug/ml5-Fu的陽性對照組和不加藥物的陰性對照組。置5%C02孵

7、箱內培養(yǎng)24,48,72h。每天在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),48h時進行常規(guī)HE染色。1.3MTT比色實驗取對數生長期的HepG-2細胞按每孔1X105個細胞接種于96孔板中,每孔體積200Hl。24h后換液,黃苓昔組加入黃苓昔使其終濃度分別為25,50,100Ug/ml,另設終濃度為25ug/ml的5-Fu陽性對照組和不加藥物的陰性對照組以及不接種細胞的空白對照組。分別培養(yǎng)24,48,72h,每個濃度每個時點均設4個復孔。于終止前4h,每孔加入5mg/mlMTT溶液20ul,繼續(xù)孵育4h后棄去上清液,加入15

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