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1、時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥2014年第25卷第3期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2014VOL．25NO．3黃芪莪術(shù)配伍對(duì)人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影響臧文華，唐德才，尹剛，李冰冰(南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江蘇南京210046)捅要：目的探討補(bǔ)氣活血藥黃芪、莪術(shù)配伍對(duì)人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影響。方法構(gòu)建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型。成瘤后，將其隨機(jī)分為5組：模型對(duì)照組、順鉑組(DDP)(2mkgDDP腹腔注射)、黃芪莪術(shù)配伍高劑量組(H)[12g／(kg·d)灌胃]、黃芪莪術(shù)配伍中劑量組(M)[6g／(kg·
2、d)灌胃]、黃芪莪術(shù)配伍低劑量組(L)[3g／(kg．d)灌胃]，每組8只。觀察黃芪、莪術(shù)配伍對(duì)原位移植瘤的作用，免疫組化sP法檢測(cè)腫瘤組織HIF一1、VEGF的表達(dá)。結(jié)果H、M、L組的瘤重抑制率為41．55％、26．48％、24．66％，瘤體積抑制率為42．91％、25．05％、23．95％，能抑制原位移植瘤的生長(zhǎng)，H組與模型對(duì)照組比較有極顯著差異(P<0．01)。免疫組化結(jié)果提示，H、M、L組HIF一1Ot、VEGF陽(yáng)性表達(dá)IOD值均下降，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0．05，P<0．O1)。結(jié)論黃芪、莪術(shù)配伍對(duì)人肝癌裸鼠原位移植瘤的生長(zhǎng)有抑制作用，并能
3、抑制腫瘤新生血管生成，其機(jī)制可能與對(duì)HIF一10l、VEGF表達(dá)的抑制有關(guān)。關(guān)鍵詞：黃芪；莪術(shù)；肝細(xì)胞癌；裸鼠；新生血管D0I標(biāo)識(shí)：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2014．03．002中圖分類號(hào)：R285．5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008-0805(2014)03-0516-03肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)具有高侵襲、易復(fù)公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(滬)2012—0006，5～6周齡，體質(zhì)量發(fā)、預(yù)后差的臨床病理特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅患者的健康甚至生命，其易18～20g，裸鼠置于恒溫(24～27℃)、恒濕
4、(45％～50％)、新鮮空轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)率高是制約預(yù)后改善的瓶頸?。中藥配伍及其提取氣高度除塵除菌、無(wú)特殊病原菌(SPF)環(huán)境下，用高壓滅菌飲用物抗腫瘤作用日益受到重視。本研究采用肝癌原位移植整體水、co輻射滅菌的專用顆粒飼料及co輻射滅菌SPF小鼠墊料動(dòng)物模型，對(duì)補(bǔ)氣活血藥物黃芪與莪術(shù)兩藥配伍治療肝癌進(jìn)行療分籠喂養(yǎng)。效觀察，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)HIF一1、VEGF的表達(dá)，探討補(bǔ)1．3儀器GBB16CO培養(yǎng)箱(德國(guó)Heraen公司)，YJ一1450型氣活血法對(duì)肝癌新生血管生成的影響，為豐富和發(fā)展方劑配伍理超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠)，臺(tái)式低速離心機(jī)(LDS—ZA，中論
5、，指導(dǎo)臨床安全合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。國(guó)北京醫(yī)用離心機(jī)廠)，微量移液器(德國(guó)Eppendof公司)，倒置1材料相差電子顯微鏡(Et本Olympus產(chǎn)品)，石蠟切片機(jī)(RM2135，德1．1藥品與試劑根據(jù)課題組前期研究結(jié)果，莪術(shù)品種采用國(guó)Leica公司產(chǎn)品)。溫郁金。黃芪、莪術(shù)分別購(gòu)自產(chǎn)地內(nèi)蒙古、浙江，經(jīng)南京中醫(yī)藥大2方法學(xué)藥學(xué)院吳德康教授鑒定，分別為豆科植物蒙古黃芪Astragalus2．1HepG2細(xì)胞培養(yǎng)將人肝癌HepG2細(xì)胞置于含10％小牛血membranaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicus(Bge．)Hsiao的干燥清、青霉素(1
6、00U／m1)、鏈霉素(mOU／m))的RPMI1640培養(yǎng)液根以及姜科植物溫郁金CurcumawenyujinY．H．ChenetC．Ling中，37℃、5％CO，條件下培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)至3d左的干燥根莖。注射用順鉑(齊魯制藥有限公司，批號(hào)右，于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞長(zhǎng)滿貼壁，即可傳代，每3天傳代1H20073652)。細(xì)胞培養(yǎng)液RPMI1640(美國(guó)Gibco公司)；新生小次。牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品，批號(hào)040622)；2．2造模取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌HepG2細(xì)胞，注射到裸鼠頸胰蛋白酶(美國(guó)Gibco公司)；兔抗人HIF一1單克隆
7、抗體(美國(guó)部皮下(每只接種HepG2細(xì)胞5×10。／100~1)，1周左右出現(xiàn)肉Bioword公司)；兔抗人VEGF單克隆抗體(美國(guó)Bioword公司)；眼可見(jiàn)腫瘤，3周腫瘤生長(zhǎng)至0．8cm×1．0cm×1．2cm時(shí)處死荷瘤sP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物科技有限裸鼠，無(wú)菌條件下剝離瘤體，放入RPMI1640培養(yǎng)液中，剔除結(jié)締公司。組織，將腫瘤組織分割成1mm×1mm×1mm的組織碎塊。另取1．2細(xì)胞株與動(dòng)物人肝癌細(xì)胞株HepG2，購(gòu)于揚(yáng)州大學(xué)中心一批裸鼠用1％戊巴比妥鈉40mg／kg行腹腔注射麻醉，手術(shù)視野細(xì)胞庫(kù)。BALB／c雄性裸鼠，購(gòu)于上海
8、斯萊克實(shí)驗(yàn)
