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1、時珍國醫(yī)國藥2014年第25卷第3期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2014VOL．25NO．3黃芪莪術配伍對人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影響臧文華，唐德才，尹剛，李冰冰(南京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，江蘇南京210046)捅要：目的探討補氣活血藥黃芪、莪術配伍對人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影響。方法構建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型。成瘤后，將其隨機分為5組：模型對照組、順鉑組(DDP)(2mkgDDP腹腔注射)、黃芪莪術配伍高劑量組(H)[12g／(kg·d)灌胃]、黃芪莪術配伍中劑量組(M)[6g／(kg·
2、d)灌胃]、黃芪莪術配伍低劑量組(L)[3g／(kg．d)灌胃]，每組8只。觀察黃芪、莪術配伍對原位移植瘤的作用，免疫組化sP法檢測腫瘤組織HIF一1、VEGF的表達。結果H、M、L組的瘤重抑制率為41．55％、26．48％、24．66％，瘤體積抑制率為42．91％、25．05％、23．95％，能抑制原位移植瘤的生長，H組與模型對照組比較有極顯著差異(P<0．01)。免疫組化結果提示，H、M、L組HIF一1Ot、VEGF陽性表達IOD值均下降，與模型對照組比較有顯著性差異(P<0．05，P<0．O1)。結論黃芪、莪術配伍對人肝癌裸鼠原位移植瘤的生長有抑制作用，并能
3、抑制腫瘤新生血管生成，其機制可能與對HIF一10l、VEGF表達的抑制有關。關鍵詞：黃芪；莪術；肝細胞癌；裸鼠；新生血管D0I標識：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2014．03．002中圖分類號：R285．5文獻標識碼：A文章編號：1008-0805(2014)03-0516-03肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)具有高侵襲、易復公司，動物許可證號：SCXK(滬)2012—0006，5～6周齡，體質量發(fā)、預后差的臨床病理特點，嚴重威脅患者的健康甚至生命，其易18～20g，裸鼠置于恒溫(24～27℃)、恒濕
4、(45％～50％)、新鮮空轉移、復發(fā)率高是制約預后改善的瓶頸?。中藥配伍及其提取氣高度除塵除菌、無特殊病原菌(SPF)環(huán)境下，用高壓滅菌飲用物抗腫瘤作用日益受到重視。本研究采用肝癌原位移植整體水、co輻射滅菌的專用顆粒飼料及co輻射滅菌SPF小鼠墊料動物模型，對補氣活血藥物黃芪與莪術兩藥配伍治療肝癌進行療分籠喂養(yǎng)。效觀察，采用免疫組化技術檢測HIF一1、VEGF的表達，探討補1．3儀器GBB16CO培養(yǎng)箱(德國Heraen公司)，YJ一1450型氣活血法對肝癌新生血管生成的影響，為豐富和發(fā)展方劑配伍理超凈工作臺(蘇州凈化設備廠)，臺式低速離心機(LDS—ZA，中論
5、，指導臨床安全合理用藥提供科學依據。國北京醫(yī)用離心機廠)，微量移液器(德國Eppendof公司)，倒置1材料相差電子顯微鏡(Et本Olympus產品)，石蠟切片機(RM2135，德1．1藥品與試劑根據課題組前期研究結果，莪術品種采用國Leica公司產品)。溫郁金。黃芪、莪術分別購自產地內蒙古、浙江，經南京中醫(yī)藥大2方法學藥學院吳德康教授鑒定，分別為豆科植物蒙古黃芪Astragalus2．1HepG2細胞培養(yǎng)將人肝癌HepG2細胞置于含10％小牛血membranaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicus(Bge．)Hsiao的干燥清、青霉素(1
6、00U／m1)、鏈霉素(mOU／m))的RPMI1640培養(yǎng)液根以及姜科植物溫郁金CurcumawenyujinY．H．ChenetC．Ling中，37℃、5％CO，條件下培養(yǎng)，細胞貼壁生長，細胞生長至3d左的干燥根莖。注射用順鉑(齊魯制藥有限公司，批號右，于倒置顯微鏡下觀察細胞長滿貼壁，即可傳代，每3天傳代1H20073652)。細胞培養(yǎng)液RPMI1640(美國Gibco公司)；新生小次。牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司產品，批號040622)；2．2造模取對數(shù)生長期的人肝癌HepG2細胞，注射到裸鼠頸胰蛋白酶(美國Gibco公司)；兔抗人HIF一1單克隆
7、抗體(美國部皮下(每只接種HepG2細胞5×10。／100~1)，1周左右出現(xiàn)肉Bioword公司)；兔抗人VEGF單克隆抗體(美國Bioword公司)；眼可見腫瘤，3周腫瘤生長至0．8cm×1．0cm×1．2cm時處死荷瘤sP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物科技有限裸鼠，無菌條件下剝離瘤體，放入RPMI1640培養(yǎng)液中，剔除結締公司。組織，將腫瘤組織分割成1mm×1mm×1mm的組織碎塊。另取1．2細胞株與動物人肝癌細胞株HepG2，購于揚州大學中心一批裸鼠用1％戊巴比妥鈉40mg／kg行腹腔注射麻醉，手術視野細胞庫。BALB／c雄性裸鼠，購于上海
8、斯萊克實驗
