實(shí)驗(yàn)土壤中產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選.ppt

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1、生物制藥學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1-5產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選及誘變系列實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)需知實(shí)驗(yàn)分組：2個(gè)實(shí)驗(yàn)室，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室分6組（名單上報(bào)），每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束留1組同學(xué)值日實(shí)驗(yàn)成績(jī)：占期末總成績(jī)的20%，包括實(shí)驗(yàn)出勤、實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)結(jié)束：將實(shí)驗(yàn)用品收拾整齊，由實(shí)驗(yàn)老師確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)報(bào)告：實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟（注意事項(xiàng)）、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、思考題系列實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)1土壤中產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選（1、2）實(shí)驗(yàn)2產(chǎn)淀粉酶菌株的誘變劑量選擇實(shí)驗(yàn)3紫外誘變劑突變菌株的初篩實(shí)驗(yàn)4紫外誘變劑突變菌株的復(fù)篩實(shí)驗(yàn)5高產(chǎn)淀粉酶生產(chǎn)菌株

2、的穩(wěn)定性及淀粉酶活力測(cè)定背景知識(shí)淀粉酶（amylase,Amy,AMS）：能水解淀粉、糖原和有關(guān)多糖中的O-葡萄糖鍵的酶藥物：助消化藥，治療功能性消化不良背景知識(shí)產(chǎn)淀粉酶微生物：細(xì)菌、真菌等菌種分離與篩選步驟：采樣——培養(yǎng)——分離——篩選誘變育種步驟：誘變——初篩——復(fù)篩——性能檢測(cè)背景知識(shí)實(shí)驗(yàn)1土壤中產(chǎn)淀粉酶菌株的篩選（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆站N分離與篩選的方法從土壤中篩選出能夠合成分泌淀粉酶的微生物實(shí)驗(yàn)原理自然界微生物種類(lèi)繁多，有些微生物能夠以淀粉作為碳源進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，這是因?yàn)樗鼈兡軌蚝铣煞置诘矸勖?。?dāng)能合成淀粉酶

3、的微生物在含有淀粉的固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，會(huì)將淀粉酶分泌到菌體周?chē)咕渲車(chē)牡矸鬯獬蔀樾》肿恿康暮?、聚糖和單糖。這些水解產(chǎn)物不能與碘作用，從而在菌體周?chē)纬赏该魅?。?shí)驗(yàn)步驟1.篩選培養(yǎng)基的配制（已完成）可溶性淀粉2g，NaCl5g，牛肉膏5g，蛋白胨10g，瓊脂20g，水1000mL。2.倒平板（每組6個(gè)，每個(gè)平板10mL左右）實(shí)驗(yàn)步驟3.土樣的采集各實(shí)驗(yàn)室分別取三種不同環(huán)境的土樣并記錄當(dāng)時(shí)取樣環(huán)境情況（1-2、3-4、5-6每?jī)尚〗M在同一個(gè)地方進(jìn)行取樣），通常取離地面5～15cm處的土壤。4.稀釋分離取土

4、樣1g，加入9mL無(wú)菌水，逐步稀釋至105、106、107（單數(shù)組）或106、107、108（雙數(shù)組），每個(gè)梯度涂2個(gè)平板。10ml1g9ml9ml9ml9ml9ml9ml10-110-210-710-610-510-410-31ml1ml1ml1ml1ml稀釋1ml分離實(shí)驗(yàn)步驟5.各組做好標(biāo)記，置于30℃恒溫培養(yǎng)48h（倒置培養(yǎng)？？）6.產(chǎn)淀粉酶菌株的鑒定（下次課）6.產(chǎn)淀粉酶菌株的鑒定倒平皿（注意培養(yǎng)基狀態(tài)、體積、表面平整）：3個(gè)用接種環(huán)挑取單菌落到無(wú)菌瓶皿上（點(diǎn)植法：用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面接觸幾點(diǎn)），同時(shí)

5、用簽字筆按對(duì)應(yīng)順序?qū)Ω鲉尉溥M(jìn)行標(biāo)號(hào)。在原培養(yǎng)皿表面噴灑稀碘液，記錄有水解圈的單菌落，與此對(duì)應(yīng)找出合成淀粉酶的菌株1-2株。注意：未分離得到菌落的小組可與其他組合作，挑取其他組鑒定得到的菌落進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)報(bào)告中注明使用哪一組的菌落）。7.產(chǎn)淀粉酶菌株的增殖培養(yǎng)液體培養(yǎng)基分裝：10ml/瓶，每個(gè)菌株對(duì)應(yīng)1瓶（每組1-2瓶，參考鑒定結(jié)果）液體培養(yǎng)基接種：用接種環(huán)從固體培養(yǎng)基表面上沾取少許菌苔，將接種環(huán)在液體培養(yǎng)基內(nèi)振搖幾次即可。做好標(biāo)記，放入搖床中振蕩培養(yǎng)24h。8.產(chǎn)淀粉酶菌株的純化——平板劃線(xiàn)法灼燒接種環(huán)，冷

6、卻后用接種環(huán)挑取少量菌苔左手持平皿，將皿蓋打開(kāi)一條縫隙，右手將接種環(huán)伸入皿中，劃3-4條平行線(xiàn)灼燒接種環(huán)，60°旋轉(zhuǎn)平皿，劃線(xiàn)（注意：后一區(qū)要求與前一區(qū)首尾相連，但不得與其他區(qū)域搭在一起）灼燒接種環(huán)，將劃線(xiàn)平板倒置，于30℃培養(yǎng)48h后觀(guān)察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析1.取樣環(huán)境情況2.記錄產(chǎn)淀粉酶菌株數(shù)量（比透明圈？？）及對(duì)菌落的初步鑒定結(jié)果3.分析：從不同地點(diǎn)獲得的結(jié)果為什么會(huì)出現(xiàn)差異？可以初步得出什么樣的結(jié)論？（未分離出菌株的原因？）細(xì)菌菌落特征較濕潤(rùn)、光滑、透明、易挑取菌落正反面或邊緣與中央部位的顏色一致質(zhì)地均勻、小

7、而突起（或大而平坦）有臭味或酸敗味酵母菌菌落特征（與細(xì)菌相似)圓形或卵圓形較濕潤(rùn)、較粘稠、光滑，易挑取菌落質(zhì)地均勻正反面、邊緣和中心顏色一致比細(xì)菌菌落大而厚，較不透明，顏色多呈乳白色多帶酒香味霉菌菌落特點(diǎn)大而疏松，呈絨毛狀（曲霉）、絮狀（毛霉）、地毯狀（青霉）或蜘蛛網(wǎng)狀（根霉）有的無(wú)固定大小，延至整個(gè)培養(yǎng)基中產(chǎn)色素，使菌落顯色放線(xiàn)菌菌落特征干燥、不透明，小而緊密，呈放射狀菌落初期表面光滑或呈致密的絲絨狀，當(dāng)產(chǎn)生孢子之后，其菌落表面呈粉狀、顆粒狀菌落和培養(yǎng)基連接緊密，難以挑取，或者整個(gè)菌落被挑起而不致破碎菌落顏色多

8、樣，菌落正反面顏色常不一致帶有泥腥味思考題1.為什么要用淀粉作為碳源？2.為什么同一個(gè)土樣要稀釋不同梯度進(jìn)行涂平板？實(shí)驗(yàn)報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)與上次實(shí)驗(yàn)合寫(xiě)一份實(shí)驗(yàn)報(bào)告即可實(shí)驗(yàn)報(bào)告在本周六實(shí)驗(yàn)課時(shí)上交注意每次實(shí)驗(yàn)課前5分鐘由各實(shí)驗(yàn)室本次值日小組將實(shí)驗(yàn)材料由準(zhǔn)備室取出至各實(shí)驗(yàn)室中實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)各組同學(xué)務(wù)必與實(shí)驗(yàn)老師處簽到后方可離開(kāi)，否則記為缺勤最后一組同學(xué)使用完超凈臺(tái)后，需將臺(tái)內(nèi)廢液、