藥物敏感試驗.ppt

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1、抗菌藥物敏感試驗細(xì)菌室李巍抗菌藥物敏感試驗定義、目的、方法培養(yǎng)基、接種菌量、培養(yǎng)條件結(jié)果閱讀判斷標(biāo)準(zhǔn)什么是抗菌藥物的敏感性試驗測定抗菌藥物在體外抑制病原微生物生長的效力，稱為抗菌藥物對細(xì)菌的抑制試驗，或稱為細(xì)菌對藥物的敏感性試驗。為什么要做藥敏試驗？供醫(yī)師選用抗菌藥物時的參考細(xì)菌耐藥性檢測和耐藥性變遷評價新抗菌藥物的藥效學(xué)特征對細(xì)菌耐藥譜分析和分型有助于某些菌種的鑒定作為醫(yī)院內(nèi)感染流行病學(xué)調(diào)查的手段之一如何進(jìn)行藥敏試驗方法學(xué)1.稀釋法--試管稀釋法--平板稀釋法2.擴(kuò)散法（紙片法）3.E-TEST4.自動化儀器幾個重要的指標(biāo)MIC（最低抑菌濃度）在體外能夠抑制細(xì)菌生長的最

2、低藥物濃度MBC(最低殺菌濃度)在體外能夠使細(xì)菌的總數(shù)減少或殺滅99.9%以上的最低藥物濃度臨界濃度根據(jù)MIC，結(jié)合常用劑量時該藥所能達(dá)到的血藥濃度，劃定細(xì)菌對各種抗菌藥物敏感或耐藥的界限如何制備菌懸液？如何取菌落？為什么至少取3個菌落？可能丟失耐藥細(xì)菌（攜帶有耐藥質(zhì)粒的耐藥菌株）擴(kuò)散法：K-B操作：-制備0.5麥?zhǔn)隙染?無菌棉簽蘸取菌液，在管壁將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去，在瓊脂表面均勻涂布3次，最后沿著平板內(nèi)緣涂抹一周-室溫或35度干燥5—10分鐘-將紙片緊貼于表面-紙片間距20厘米，離平板內(nèi)緣15厘米如何閱讀結(jié)果（紙片法）工具：游標(biāo)卡尺、尺子光源：反射光、透射光閱讀：背襯不

3、反光的黑色背景用肉眼觀察，也可用BIOMIC機器閱讀紙片法結(jié)果的正確閱讀反射光不反光的黑色背景完全抑制的抑菌圈直徑，包括紙片的直徑抑菌圈的界限應(yīng)該是以肉眼觀察沒有明顯的可見細(xì)菌生長區(qū)域在抑菌圈邊緣微弱生長的、僅能在放大鏡下才能觀察到的細(xì)小菌落應(yīng)忽略應(yīng)注意葡萄球菌、腸球菌的閱讀苯唑西林、利奈唑胺和萬古對葡萄球菌的抑制圈萬古霉素對腸球菌的抑制圈任何有可見的菌落生長均視作對上述抗菌藥物耐藥需在透視光下閱讀，遇不敏感的結(jié)果需用稀釋法測MIC確證應(yīng)注意磺胺類藥物的結(jié)果閱讀培養(yǎng)基可能含有拮抗物如胸腺嘧啶、核苷類物質(zhì)，允許有輕微生長的薄菌苔忽略20%或更低生長的薄菌苔，測量抑菌圈直徑較

4、為明顯的細(xì)菌生長界限下列細(xì)菌均注意：腸桿科、不動、伯克、葡萄、嗜血、肺鏈、弧菌屬、腦膜炎奈瑟菌應(yīng)注意變形桿菌屬的閱讀生長呈遷移性在一些抗菌藥物抑菌環(huán)可見霧霾樣遷徙生長的菌苔霧霾樣生長忽略不計忽略遷移性應(yīng)注意溶血性細(xì)菌的結(jié)果閱讀鏈球菌--β-溶血鏈球菌--草綠色鏈球菌--肺鏈應(yīng)忽略溶血區(qū)，讀取生長完全被抑制處注意產(chǎn)色素細(xì)菌的結(jié)果閱讀有些細(xì)菌在生長的過程中產(chǎn)生色素--銅綠--黃桿菌--沙雷菌應(yīng)忽略色素分泌圈，讀取生長完全被抑制處解讀注意事項1、藥敏試驗是參照美國的CLSI推薦的標(biāo)準(zhǔn)制定的。2、細(xì)菌全自動分析儀的藥敏組合是固定的。3、某些細(xì)菌對某類抗生素天然耐藥，則不需要做藥敏

5、試驗。4、試驗的藥物代表一類藥，而不是一種藥。解讀注意事項5、對葡萄球菌一代比三代頭孢治療效果好。6、有些藥物不適用于單獨使用，僅用于聯(lián)合用藥，如利福平。7、因為是體外藥敏試驗，有些藥體外試驗敏感，可能臨床治療無效。8、同一菌株可能出現(xiàn)亞種，導(dǎo)致連續(xù)藥敏結(jié)果不吻合。細(xì)菌耐藥概念多重耐藥（MDR）:指細(xì)菌同時對三種以上結(jié)構(gòu)不同（作用機制不同）抗菌藥物耐藥，如頭孢菌素、喹諾酮類、氨基糖苷類；泛耐藥（PDR）:細(xì)菌對本身敏感的所有藥物耐藥；超級細(xì)菌:并非科學(xué)概念，一般指PDR與部分MDR，沒有確切定義，以下細(xì)菌屬于此列：MRSA/VRSA;VRE;MDR-PA,PDR-AB;E

6、SBL(+)+AmpC(+)腸桿菌產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌（產(chǎn)KPC酶、包括產(chǎn)NDM-1細(xì)菌）MRSA：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌VRSA：耐萬古霉素金黃色葡萄球菌VRE：耐萬古霉素腸球菌ESBLs：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶KPC酶：產(chǎn)碳青霉稀酶的一種KPC型NDM-1：Ⅰ型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶下面就以上幾種情況分別解讀與臨床溝通中常見問題1、我們想用的藥物在藥敏試驗中沒有做？可能是天然耐藥可能是藥物的敏感性被其他藥物所預(yù)報與臨床溝通中常見問題2.為什么有的菌報告很多種藥物，有的僅報告幾種藥物？報告的藥物種類根據(jù)細(xì)菌種類的不同而有所不同，如銅綠假單胞菌報告的藥物較多，而嗜麥芽窄食單胞

7、菌報告的藥敏較少CLSI藥敏建議與臨床溝通中常見問題3、是否能將所用的藥都做藥敏試驗?沒有必要：通過耐藥機制和標(biāo)志性藥物可以預(yù)測其他抗菌藥物的敏感性沒有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標(biāo)準(zhǔn)和解釋標(biāo)準(zhǔn)）與臨床溝通中常見問題4、在藥敏試驗報告中MIC越小的抗菌藥物效果越好嗎？如何根據(jù)MIC聯(lián)合用藥？感染菌對同一種藥物的MIC越小，效果越好不同種抗菌藥物之間MIC無可比性目前很多儀器報告的是檢測折點，而不是真正的MIC與臨床溝通中常見問題5、培養(yǎng)陽性的細(xì)菌都需要用抗菌藥物治療嗎？不是的培養(yǎng)陽性?感染