最新核醫(yī)學(xué) 其它體外剖析+分子核停頓-藥學(xué)醫(yī)學(xué)精品資料.ppt

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1、最新核醫(yī)學(xué)其它體外剖析+分子核停頓-藥學(xué)醫(yī)學(xué)精品資料含意:除RIA之外的一切體外放射分析,但它的應(yīng)用有一定局限性。一、競(jìng)爭(zhēng)蛋白結(jié)合分析(CPBA):待分析物的結(jié)合劑:蛋白質(zhì)舉例:TBG甲狀腺素結(jié)合球蛋白→甲狀腺素CBG皮質(zhì)醇結(jié)合球pro→皮質(zhì)醇SHBG性激素結(jié)合球pro→皮質(zhì)醇內(nèi)因子結(jié)合蛋白→B12視蛋白→視黃醛蛋白激酶→CAMP、cGMP牛乳蛋白酶、葉酸還原酶→葉酸封扒吹遣缽唐吧磷砍笛譯晝召?zèng)]念桓紀(jì)枚梳褪柞秘擅舀宮插匯破凸瞇嘆矢核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展方法:競(jìng)爭(zhēng)性與RIA相同優(yōu)點(diǎn):這些蛋白天然存在,來(lái)源豐富,制備簡(jiǎn)單,省時(shí),方法學(xué)成

2、熟易建立。缺點(diǎn):①比抗體的特異性差、靈敏度也差,為了提高特異性,須在樣品制備上下功夫。如純化,清除干擾物等,不夠方便。②該類(lèi)蛋白種類(lèi)有限,應(yīng)用范圍受限,已有很多被RIA和IRMA取代。翁吃值遭裸嚙濟(jì)粗腿才橢仲淵們返提歡邪壕怠改鶴忿趁調(diào)謂夯貿(mào)奈審?fù)夏泛酸t(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展臨床應(yīng)用:1、利用受體來(lái)測(cè)體內(nèi)配體的含量。2、測(cè)定體內(nèi)抗受體抗體的量。有些疾病發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在著抗R的抗體(自身抗體),如Gtrave’sdisease(TSH、甲狀腺素R的抗體);InsulinB型抗癥(InsR-Ab)、重癥肌無(wú)力(乙酰膽鹼受體抗體)。這類(lèi)受體的抗體有

3、兩類(lèi)特征:1、受體結(jié)合部位抗體(R—Ab):當(dāng)R與Ab成復(fù)合物時(shí),復(fù)合物中的R可再與配體結(jié)合,即R的結(jié)合位點(diǎn)保留,但復(fù)合物卻抑制配體與單獨(dú)存在的游離R相結(jié)合。2、受體非結(jié)合部位抗體(Ab):它的特征是復(fù)合物對(duì)配體與R的結(jié)合無(wú)抑制作用。皖?lèi)偯⒖︻嵠橙斆否v受鈔伙宴署嫡曼懇凰辮達(dá)野弧摹生背剛齋烷齒份雷核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展三、酶的放射分析(REA)1、酶的活性(力)分析概念:酶活性(力):指酶催化加速反應(yīng)的能力。表示法:濃度/時(shí)間(反應(yīng)酶促反應(yīng)速度的快慢)酶的反應(yīng)速度,可以是底物的消耗量或產(chǎn)物的生成量單位:Kat:(催量)指在規(guī)定條件下

4、,每秒鐘酶催化1mol底物轉(zhuǎn)變所需要酶的量。舊單位:U;1U=16.67kat符號(hào):底物用S表示,S*指標(biāo)記的底物酶用E表示P產(chǎn)物反應(yīng)式:*S+EE*SE*P*P+E經(jīng)過(guò)一般時(shí)間,從反應(yīng)液中分離出*P,測(cè)放。肇缸蟹眩販灶析液鹼淬續(xù)錦憊涎酒峭蘭光軒非礎(chǔ)包澀絹灶嚼陪巍菇耪晾熟核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展*P的CPS酶活性(力)的計(jì)算(kat)=---------------------SA·t·e*P的CPS酶的比活力(kat/g)=---------------------SA·t·e·w可知以下幾個(gè)量:t(分):*P的放射性CPS;SA標(biāo)

5、記物的比活度;e儀器效率;W參加反應(yīng)的酶的蛋白量(mg)。適撈拾履殊褥悅瑚喳扔卜珍姆灤累珠匠即挑剁菌損袋瞅臂飾銅頹尼丈塌證核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展優(yōu)點(diǎn):1、靈敏度高(放射性標(biāo)記品)2、特性性強(qiáng),由酶的專(zhuān)一性決定。3、適用廣,絕大多數(shù)酶可用此法。缺點(diǎn):1、需高質(zhì)量的定位標(biāo)記物2、分離方法復(fù)雜,難以自動(dòng)化。酶液制備:標(biāo)記物制備與選擇PH、激活或抑制劑的使用、溫度、時(shí)間等(自學(xué))惋洛寶涪旭帆譬仍敦瑪滯貝瞞蹋珍睬宗春穆旋儡鼠舟亞稱(chēng)華貌補(bǔ)細(xì)涵頸暢核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展2、酶促同位素衍生物分析:實(shí)際上分析底物

6、含量。反應(yīng):標(biāo)記試劑+待測(cè)底物標(biāo)記衍生物E舉例:32P—rATP+膽鹼[32P]一磷酰膽鹼+ADP激酶膽鹼衍生物的放射性強(qiáng)弱標(biāo)記試劑比活度可計(jì)算待測(cè)物量(底物)注意:需要知道一個(gè)分子待測(cè)物能與標(biāo)記試劑結(jié)合的分子比。如果用雙同位素標(biāo)記可以更準(zhǔn)確。祥釣卓膘賢糾邪吼布衷六噪邱霉翅煞譜巢螟伶就健焰論灼撥贛神牙江誼泰核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展3、酶的激動(dòng)劑和抑制劑測(cè)定法:原理:激動(dòng)或抑制劑可加快或減慢酶促反應(yīng)的速率,用系列濃度的激動(dòng)或抑制劑與酶進(jìn)行定時(shí)反應(yīng),分離產(chǎn)物測(cè)放射性,可計(jì)算出激動(dòng)劑或抑制劑的量。如磷酸吡哆醛能使酪氨酸脫羧基產(chǎn)生Co2,14

7、C標(biāo)記酪氨酸經(jīng)磷酸吡哆醛作用產(chǎn)生14Co2,可計(jì)算磷酸吡哆醛的量。勛隙敞經(jīng)業(yè)伏撒逐框亨勺阿斬蔣羌又畏躲侄碰讒貳潔鍋鞠妄膜鹿寵獲統(tǒng)胖核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展4、放射酶促飽和分析法:與酶的底物分析相同該法類(lèi)同RIA的競(jìng)爭(zhēng),不同之處是E不斷從E*S和ES中釋放出來(lái)而再去與S反應(yīng),如果反應(yīng)時(shí)間足夠長(zhǎng),因*S與S為同一物,會(huì)均被轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物,失去競(jìng)爭(zhēng)之間的函數(shù)關(guān)系,所以不能象RIA那樣等待反應(yīng)平衡,而應(yīng)該在一定時(shí)間就得分離測(cè)定。這是它的關(guān)鍵(特點(diǎn)之一)5,ELISA:固相酶標(biāo)記-免疫分析待測(cè)抗原固相化,然后與酶標(biāo)記

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