磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法.doc

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磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L稱7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L。保存于4℃冰箱中即可。需要注意的是，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2MNa2HPO4：稱取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：稱取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需將0.2MPB(pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如： 0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。若需要NaCl的話，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各種另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.5 6.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.5 7.97938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4℃冰箱中。需要注意的是，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時候分別加入100u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO42.22.22.22.2NaH2PO40.10.20.30.4 根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過晝夜的時間后，PH值會明顯改變（我親自測過偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個時候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題。每次使用前最好用試紙測一下過夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PBS緩沖液稱取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆?。PBST緩沖液取300μlTween-20加入PBS100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后，PH自動升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個可以先取少量試一試，配好之后再測一次~PH8.0的PBS配方詳細(xì)1.NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：上述PBSBuffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。0.05mol/LPBS(磷酸緩沖液PhosphateBufferSolution，PBS)的配制：甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉9.465g7.099g,加蒸餾水至1000ml;乙液：0.05mol/LKH2P04溶液:稱取磷酸二氫鉀,9.07g6.803g,加蒸餾水至1000m1。將甲乙液分裝在棕色瓶內(nèi)，于4℃冰箱中保存，用時甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表:pH甲液ml乙液mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.0 6.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。