資源描述：
《不同的抗原修復(fù)方法對腎活檢標(biāo)本石蠟切片免疫熒光染色的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、不同的抗原修復(fù)方法對腎活檢標(biāo)本石蠟切片免疫熒光染色的影響譚文1賈曉敏21.長沙市第八醫(yī)院病理科，湖南長沙410000；2.湖南省人民醫(yī)院病理科，湖南長沙410000[摘要]目的探討了不同的抗原修復(fù)方法對腎活檢標(biāo)本石蠟切片免疫熒光染色的影響。方法選取該院30例腎活檢標(biāo)本作為研究對象，隨機(jī)分成對照組與研究組，對照組采用冰凍切片方法，研究組采用石蠟切片方法，其中分成應(yīng)用無抗原修復(fù)組、胰酶抗原修復(fù)組、高壓加熱抗原修復(fù)組，均進(jìn)行免疫熒光染色。分析和對比研究組與對照組標(biāo)本的免疫熒光染色結(jié)果。結(jié)果研究組中的胰酶抗原修復(fù)組與對照組的免疫熒光染色結(jié)果基本相同（P＜0.05）；研究組中高壓加
2、熱抗原修復(fù)組的假陰性明顯高于對照組（P＜0.05），研究組中無抗原修復(fù)組的染色效果比對照組較差（P＜0.05）；兩組所觀察的有效腎小球數(shù)均≥3個，兩組數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論冰凍切片的免疫熒光染色標(biāo)本無腎小球的時候，可以采用胰酶抗原修復(fù)作為補(bǔ)救措施。.jyqk厚石蠟切片，和2μm厚的冰凍切片，冰凍切片為對照組，石蠟切片為研究組，并將研究組的標(biāo)本隨機(jī)分為胰酶抗原修復(fù)組、無抗原修復(fù)組、高壓加熱抗原修復(fù)組，分析和對比兩組的免疫熒光染色結(jié)果，兩組患者的年齡、性別、病程、病史等一般資料，數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。1.2方法1.2.1儀器與試
3、劑準(zhǔn)備儀器準(zhǔn)備：1個濕盒、1個電高壓消毒鍋，和3個過酸立式染缸。所有標(biāo)本均采用型號為Nikon，80i的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。試劑為：由丹麥DAKO公司生產(chǎn)的異硫氰熒光素標(biāo)記的免抗人IgA、IgG、IgM、C1g、C3、Fib，和福州邁新生物技術(shù)公司生產(chǎn)的胰酶，以及采用自配制的枸櫞酸-枸櫞酸鹽緩沖液，3%過氧化氫溶液、PBS液。1.2.2修復(fù)方法先將所有標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)處理。將玻片進(jìn)行特殊處理后浸泡在多聚賴氨酸中，取出干燥備用。然后進(jìn)行連續(xù)切片2μm，裱于載玻片上，將其置于60℃上進(jìn)行烤片，5h后取脫蠟水對標(biāo)本進(jìn)行清洗，采用PBS緩沖液反復(fù)清洗數(shù)次，取3%過氧化氫溶液將標(biāo)本的過
4、氧化物酶進(jìn)行去除，處理時間一般為10min。最后，按照研究組的3種抗原修復(fù)方法分別進(jìn)行免疫熒光染色。①無抗原修復(fù)組。標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)處理后，放置待用。②胰酶抗原修復(fù)組。將常規(guī)處理后的標(biāo)本在37℃的恒溫箱子里采用0.25%的胰酶進(jìn)行孵育，當(dāng)15min以后再用蒸餾水對標(biāo)本進(jìn)行反復(fù)沖洗兩次，將標(biāo)本上的胰酶沖洗干凈。③高壓加熱抗原修復(fù)組。將枸櫞酸-枸櫞酸鹽緩沖液倒入過酸立式染缸中，再將立式染缸放進(jìn)電高壓消毒鍋中，蓋上鍋蓋，打開壓力閥，將過酸立式染缸中的枸櫞酸-枸櫞酸鹽緩沖液煮沸，然后打開鍋蓋，將常規(guī)處理好的標(biāo)本放入枸櫞酸-枸櫞酸鹽緩沖液中，將電高壓消毒鍋進(jìn)行密封，并蓋上鍋蓋和關(guān)緊壓力
5、閥，再次進(jìn)行加熱，直到電高壓消毒鍋開始噴氣，并噴氣兩分鐘后，將電高壓消毒鍋的電源關(guān)閉，打開壓力閥和鍋蓋，然后將鍋內(nèi)的過酸立式染缸取出，于常溫下放置20min，冷卻待用。研究組所有標(biāo)本均進(jìn)行不同的修復(fù)方法處理后，用蒸餾水反復(fù)沖洗兩次，再用PBS緩沖液清洗兩次，每次清洗時間為3min，清洗完成后將標(biāo)本擦干，與冰凍切片一起放入準(zhǔn)備好的濕盒內(nèi)，取相應(yīng)的抗體10μL分別滴入標(biāo)本上，在保持37℃的恒溫下進(jìn)行孵育，1h后，再次取PBS對標(biāo)本進(jìn)行清洗2次，最后取甘油進(jìn)行封片處理。用熒光顯微鏡觀察染色結(jié)果。1.3觀察指標(biāo)觀察和比較兩組的有效腎小球數(shù)和熒光抗體IgG、IgA、IgM、C1q、
6、C3的沉積位置。根據(jù)熒光抗體的沉積位置和熒光強(qiáng)度進(jìn)行評定標(biāo)本的陽陰性，陰性（-）：采用低倍鏡無法看見熒光，采用高倍鏡似可見熒光；弱陽性（+）：采用低倍鏡似可見熒光，采用高倍鏡可見熒光；陽性（++）：采用低倍鏡可以明顯的看見熒光，采用高倍鏡熒光非常清晰；較強(qiáng)陽性（+++）：在低倍鏡下熒光非常清晰，在高倍鏡下熒光表現(xiàn)為耀眼；強(qiáng)陽性（++++）：在低倍鏡下熒光表現(xiàn)為耀眼，在高倍鏡下熒光表現(xiàn)為刺眼。1.4統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1兩組有效腎小球數(shù)比較兩組標(biāo)本所觀察到的有效腎小球數(shù)均≥3個，
7、兩組數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。2.23種抗原修復(fù)法與對照組免疫熒光染色比較研究組中的胰酶抗原修復(fù)組與對照組的免疫熒光染色結(jié)果基本相同（P＜0.05）；研究組中高壓加熱抗原修復(fù)組的假陰性明顯高于對照組（P＜0.05），研究組中無抗原修復(fù)組的染色效果比對照組較差（P＜0.05）。見表2。3討論在腎疾病的診斷過程中，腎活檢組織免疫的檢查起到診斷標(biāo)志性的作用，在腎活檢組織免疫的檢查中，主要分為冰凍切片免疫熒光染色檢查和石蠟切片免疫熒光染色檢查。但是在傳統(tǒng)的驗(yàn)證中，由于福爾馬林固定會使標(biāo)本的蛋白質(zhì)產(chǎn)生交聯(lián)的現(xiàn)象，抗原
