石杉堿甲與pocd模型大鼠海馬ca1區(qū)chat表達相關性的研究

石杉堿甲與pocd模型大鼠海馬ca1區(qū)chat表達相關性的研究

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1、石杉堿甲與POCD模型大鼠海馬CA1區(qū)ChAT表達相關性的研究【摘要】目的探討腹部的手術操作對老年大鼠學習認知能力的影響和海馬CA1區(qū)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)陽性神經(jīng)元的變化以及石杉堿甲干預的結(jié)果。方法20月齡ethods32orrisazetestedonthe1st,3rdand7thdayafteroperation,theanimalsmediatelyremovedfordeterminationofChATexpressioninCA1regioninhippocampususingimmunohistoch

2、emistry.ResultsMorrisazetestedonthe1stdayafteroperation,paredmingdistanceofgroupsAandCbothextended(P<0.05).Onthe3rddayafteroperation,paredmingdistanceofgroupO,groupHupextendedfurther,mingdistanceofgroupHupshortened(P<0.05);paredmingdistanceofgroupOdecreasedo

3、nthe7thdayafteroperation.paredeanpercentageoftimeanddistanceofgroupOspentsminginthequadrantshortened(P<0.05).paredpusofgroupOincreasedonthe7thdayafteroperation(P<0.05),pusofgroupCpairmentappearedintheearlystageaftersplenectomyonagedrats,ChATexpressioninCA1re

4、gioninhippocampusupregulated,administeringhuperzineA0.15mg/kgforthreeconsecutiveprovethecognitiveabilityofratspal,cholineacetyltransferase  術后認知功能障礙(POCD)現(xiàn)在臨床上廣泛關注,老年人由于機體退行性變導致術后早期POCD的發(fā)生率大大增加,但其發(fā)生機制不甚清楚。腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)在高級動物的學習記憶中起著重要作用[1],但在POCD發(fā)生機制中的作用并不清楚。我們選擇反映應膽堿能神

5、經(jīng)的膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(cholineacetyltransferase,ChAT)作為觀察指標,旨在研究其與POCD發(fā)生發(fā)展的關系,探討POCD的發(fā)生機制。另一方面,目前對POCD預防和治療的有效性研究較少,為探討對POCD的治療策略,我們對脾切除術后大鼠認知障礙進行藥物干預研究。以往研究表明石杉堿甲(huperzineA,HupA)具有很好的抗衰老和改善學習記憶功能作用[2],本文以神經(jīng)生理學和組織細胞學兩方面研究該藥對脾切除術后大鼠認知障礙的影響?! ?材料與方法  1.1藥物與試劑石杉堿甲(河南竹林眾生制藥公司),氯胺

6、酮(福建古田藥業(yè)公司),山羊抗膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶多克隆抗體(GoatAntiChAT,chemicon)?! ?.2動物分組及模型制備20月齡雄性orris水迷宮測試,將圓池內(nèi)壁和平臺漆成黑色點,通過自動圖像拍攝系統(tǒng)記錄游泳軌跡,入水至找到平臺為潛伏期,其總行程為游泳距離[3]。術前學習5d,每天測試4次,取其平均值,術后1、3、7d分別進行測試,并于術后7d撤掉平臺,記錄60s內(nèi)大鼠在每個象限的停滯時間和在每個象限游泳的距離?! ?.4免疫組化染色  1.4.1灌注和切片:大鼠行為學觀察結(jié)束后,氯胺酮(25mg/kg)腹腔

7、麻醉動物,暴露心臟,先以0.9%生理鹽水經(jīng)升主動脈灌注沖洗后,灌注4%多聚甲醛溶液(pH=7.4)900ml,持續(xù)2h后取腦,將腦置于20%蔗糖的PBS溶液中浸置24~48h(4℃),冰凍冠狀連續(xù)切片(厚度30μm),海馬組織每5張取1張?! ?.4.2免疫組化染色步驟:切片置于0.3%Triton中浸30min,PBS液洗3次,每次15min;在稀釋濃度為1∶2000的山羊抗ChAT多克隆抗體中孵育72h(4℃);PBS液漂洗后在生物素標記二抗(1∶100)中,室溫下孵育1h;辣根過氧化物酶標記鏈霉卵白素(1∶100)中

8、,室溫下孵育1h;二氨基聯(lián)苯氨(DAB)反應液中成色,室溫下10~20min;常規(guī)明膠裱片、脫水、DPX封片。為了計算ChAT細胞數(shù)目,采用標準網(wǎng)格的技術方法,在100倍的光鏡下做ChAT細胞計數(shù),以“500μm×400μm”為單位,結(jié)果取3個視野的平均值?! ?.5統(tǒng)計方法計量資料用均數(shù)±標準差(x±

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