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1、吉林醫(yī)學(xué)2014年7月第35卷第19期·4l33··實(shí)驗(yàn)研究·紅景天苷對(duì)糖尿病模型大鼠海馬CA1區(qū)ChAT和BDNF陽(yáng)性神經(jīng)元的影響’郎云峰，孟可，趙珩(1．吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春130000；2．吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130000)[摘要]目的：探討紅景天苷對(duì)糖尿病模型大鼠海馬CAI區(qū)ChAT和BDNF陽(yáng)性神經(jīng)元的影響。方法通過(guò)構(gòu)建Wistar大鼠糖尿病模型，利用水迷宮試驗(yàn)及免疫組化法考察紅景天對(duì)糖尿病模型大鼠海馬CA1區(qū)ChAT和BDNF陽(yáng)性神經(jīng)元的影響。結(jié)果：紅景天苷給藥組大鼠的學(xué)習(xí)能力及記憶能力均得到增強(qiáng)，且其海馬CA1區(qū)ChAT和BDNF陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量均高于糖尿
2、病組大鼠。結(jié)論：推測(cè)糖尿病模型鼠的學(xué)習(xí)能力及記憶能力的改善可能是通過(guò)紅景天苷的藥理作用，增強(qiáng)了糖尿病模型組大鼠的海馬CA1區(qū)ChAT和BDNF的表達(dá)，并調(diào)節(jié)神經(jīng)元的存活、分化、再生，從而提升了中樞系統(tǒng)膽堿能系的功能。[關(guān)鍵詞】糖尿??；紅景天苷；膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(BDNF)糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)病變是糖尿病重要的合并癥之一，輕者每次4O～60min，經(jīng)過(guò)過(guò)濾后，浸液濃縮至無(wú)醇味，加入適量出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙，嚴(yán)重者出現(xiàn)癡呆，嚴(yán)重地影響老年患者的的水控溶，之后所得水溶液用正丁醇將其萃取，揮發(fā)所得溶液生活質(zhì)量。目前尚缺少特效治療藥物及方法。紅景天苷是紅最后制得干粉2．5g。景天的主
3、要活性成分，其在抗衰老、調(diào)節(jié)新陳代謝、雙向調(diào)節(jié)1．2．2動(dòng)物模型構(gòu)建：適應(yīng)性喂養(yǎng)2周實(shí)驗(yàn)大鼠，挑取合格血糖、抗疲勞、提高中樞興奮性、抗輻射等方面有顯著療效，近大鼠并將其禁食24h，每只大鼠進(jìn)行單次腹腔注射STZ年來(lái)國(guó)內(nèi)外的醫(yī)學(xué)工作者對(duì)紅景天進(jìn)行的深入研究表明，紅(60mg／kg，溶于pH4．2，0．1mol／L枸櫞酸鈉緩沖液)，并于景天苷具有促進(jìn)PC12細(xì)胞分化和抑制細(xì)胞凋亡的作用。目3d后檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠的尾靜脈血上的血糖濃度。實(shí)驗(yàn)大鼠模前為止，尚無(wú)實(shí)驗(yàn)證據(jù)證實(shí)紅景天苷對(duì)糖尿病大鼠學(xué)習(xí)功能型以血糖濃度大于l6．67mmol／L為指標(biāo)以確定是否真正建及記憶功能的改善作用。模成功。正常實(shí)驗(yàn)大鼠對(duì)照
4、組(CON)的1O只大鼠僅腹腔注本研究通過(guò)構(gòu)建Wistar大鼠糖尿病模型，利用水迷宮試射等容積的緩沖液。驗(yàn)及免疫組化法考察紅景天對(duì)糖尿病模型大鼠海馬CAI區(qū)1．2．3水迷宮試驗(yàn)：morris水迷宮實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)是大鼠在水中ChAT和BDNF陽(yáng)性神經(jīng)元的影響，從而為紅景天的臨床應(yīng)用有強(qiáng)烈的逃避水環(huán)境的動(dòng)機(jī)，并以最快、最直接的途徑逃離水提供依據(jù)。環(huán)境。該試驗(yàn)在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所完成。水迷宮實(shí)驗(yàn)設(shè)備包括一個(gè)黑色圓形水池高、一個(gè)平臺(tái)、一臺(tái)跟蹤攝像機(jī)1材料與方法以及攝像機(jī)相聯(lián)的計(jì)算機(jī)。池內(nèi)盛水深約50cm，水溫約為1．1實(shí)驗(yàn)材料22℃一24cIc。平臺(tái)置于水面下2cm。在水中加入牛奶將水?dāng)?．1．1
5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康雄性渾以免讓動(dòng)物看清水下平臺(tái)攝像機(jī)位于水池中央上方Wistar大鼠(12周齡，體重200—250g)。200cm，記錄大鼠的位置、游泳距離和時(shí)間以及游泳路徑等。1．1．2實(shí)驗(yàn)藥品：紅景天苷為紅景天根莖提取物，紅景天系房間周?chē)鷫Ρ谏腺N有色彩鮮明、形狀不同的圖畫(huà)做為迷宮外景天科紅景天屬植物，提供自吉林東豐藥業(yè)股份有限公司；鏈暗示。該試驗(yàn)周期為4d，將水池分為4個(gè)象限，平臺(tái)置于其中一個(gè)象限區(qū)的中央。將大鼠頭朝池壁放入水中，放入位置脲佐菌素(STZ)為Amrcseo公司產(chǎn)品。隨機(jī)取東、西、南、北四個(gè)起始位置之一。記錄動(dòng)物找到水下1．1．3實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：ACC
6、U—CHEK血糖儀(德國(guó)羅氏)、平臺(tái)的時(shí)間，該時(shí)間即為逃避潛伏期時(shí)間。Morris水迷宮自動(dòng)監(jiān)控儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)、Ls一3000+冰凍切片機(jī)(沈陽(yáng)龍首電子儀器)、TGL20M型低溫1．2．4石蠟切片免疫組化試驗(yàn)：采用SP法將石蠟切片逐級(jí)脫臘至水，磷酸緩沖液沖洗5rain，該實(shí)驗(yàn)過(guò)程重復(fù)進(jìn)行3次。高速離心機(jī)(湖南湘立科學(xué)儀器有限公司)、uV一3200S型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(南京途威貿(mào)易有限公司)、YS100型顯微組織切片抗原熱修復(fù)步驟：枸櫞酸鹽修復(fù)液，95~C一98~C，持續(xù)5—10min，待冷卻至室溫，磷酸緩沖液沖洗5rain，鏡(Et本Nikon)。反復(fù)進(jìn)行3次。免疫組化染色
7、步驟如下：3％過(guò)氧化氫室溫阻1．2實(shí)驗(yàn)方法斷15rain；磷酸緩沖液沖洗5min，反復(fù)進(jìn)行3次；5％正常山羊1．2．1試驗(yàn)樣品制備：取紅景天根莖100g，粉碎后在血清封閉，室溫孵育30rain；傾去血清，滴an(1：100)稀釋的一1000ml的70％乙醇中浸泡72h，浸液經(jīng)減壓回流提取2次，抗，4'E過(guò)夜；磷酸緩沖液沖洗5rain，反復(fù)進(jìn)行3次。滴加生物索化的二抗5O，室溫孵育20min；磷酸緩沖液沖洗5r
