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1、茜草醇提取物對(duì)刀豆蛋白A致小鼠肝損傷保護(hù)作用的研究：王潔王淑靜張炎朱佳佳王強(qiáng)【摘要】目的探討茜草醇提浸膏對(duì)刀豆蛋白A(ConA)致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法采用昆明種小鼠，灌胃給予6、10、16g·kg-1·d-1的茜草醇提浸膏和聯(lián)苯雙酯滴丸溶液(0.2g·kg-1·d-1)灌胃。14d后尾靜脈注射ConA20mg·kg-1制備小鼠急性肝損傷模型，8h后取血用化學(xué)比色法檢測血清ALT、AST活性;同時(shí)用酶聯(lián)免疫法測定肝組織勻漿中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量的變化及觀察肝臟病理學(xué)變化。結(jié)果與模型對(duì)照組相
2、比，茜草醇提浸膏16g·kg-1·d-1組小鼠ALT、AST活性明顯降低(P<0.01)，肝組織勻漿中IL-1β、TNF-α的含量明顯下降(P<0.01)，IL-4、IL-10含量升高(P<0.01)，能明顯改善肝組織的病理學(xué)損傷。結(jié)論茜草醇提浸膏對(duì)ConA所致小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】茜草;急性肝損傷;細(xì)胞因子;刀豆蛋白A 茜草(RadixRubiaeCordifoliae)屬植物所含的化學(xué)成分主要有醌類、環(huán)己肽類、三萜類和多糖等，其藥理作用主要有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化、抗癌、促凝和抗凝、抑制
3、病毒復(fù)制、穩(wěn)定肥大細(xì)胞等作用[1]。本研究主要通過對(duì)茜草(地上部分)醇提浸膏能否調(diào)節(jié)刀豆蛋白(ConcanavalinA，ConA)引起的免疫性肝損傷血清中Th1/Th2細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，觀察其是否有保護(hù)肝臟的作用?！ ?材料與方法 1.1藥品茜草，茜草醇提取浸膏由本室提取(用75%的乙醇提取3次，回收乙醇，得到浸膏)?！ ?.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性昆明種小鼠60只，體重(20±2)g，8周齡，購自寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(寧)2005-0001?！ ?.3主要試劑ConAⅣ型(美國Sigma公司);聯(lián)苯雙酯滴
4、丸(Bifendatepills，浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)0701003)，多聚甲醛(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20080112)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20090815)。IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10ELISA檢測試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)2009.8.20)?！ ?.4主要儀器721分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司);高速低溫離心機(jī)(日立公司CF16RX);DK-S14型電熱恒溫水浴箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，550酶標(biāo)儀(B
5、io-RAD公司)?！ ?.5方法[2]將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，聯(lián)苯雙酯組(0.2g·kg-1·d-1)，茜草醇提浸膏高(16g·kg-1·d-1)、中(10g·kg-1·d-1)、低劑量組(6g·kg-1·d-1)。各組均灌胃給藥，容量為0.2mL·10g-1·d-1，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等容量生理鹽水，每天1次，共14d。末次給藥4h后，除正常對(duì)照組尾靜脈注射生理鹽水外，其余各組動(dòng)物均一次性尾靜脈注射ConA20mg·kg-1。禁食，不禁水，8h后摘小鼠眼球取血，3000r·m
6、in-1，離心10min，收集血清待測。取左葉相同部位肝臟，4%多聚甲醛固定作病理切片。取肝左葉組織0.5g，用冷生理鹽水洗去浮血，拭干，加冷生理鹽水制成10%肝勻漿，3000r·min-1，離心10min，取上清液待測?！ ?.6測定指標(biāo)血清ALT、AST活性均按試劑盒要求測定;肝組織勻漿IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10采用ELISIA檢測試劑盒按說明測定?！ ?.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，多組樣本均數(shù)間比較采用One-wayANOVA檢驗(yàn)，
7、P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！ ?結(jié)果 2.1肝臟組織病理學(xué)觀察正常對(duì)照組小鼠肝臟外觀呈紅褐色，質(zhì)地軟而富有彈性;肝小葉結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列整齊，無炎細(xì)胞浸潤。模型對(duì)照組小鼠肝臟體積增大;肝細(xì)胞變性明顯，可見細(xì)胞氣球樣變，胞漿疏松化及灶狀壞死，嚴(yán)重的呈片狀壞死，匯管區(qū)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，呈片狀壞死。聯(lián)苯雙酯組和茜草醇提浸膏高劑量組肝臟略有水腫，質(zhì)地柔軟;肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整，細(xì)胞排列較整齊，只有少量的炎細(xì)胞浸潤，較模型組有明顯改善。茜草醇提浸膏中、低劑量組小鼠肝臟體積也有所增大，肝細(xì)胞亦有變性，細(xì)胞氣球樣變，局部
8、有灶狀壞死，炎細(xì)胞浸潤較多，較模型組有所改善(圖1，見封4)?！ ?.2茜草醇提浸膏對(duì)血清ALT和AST的影響與模型對(duì)照組相比，茜草醇提浸膏各劑量組可使ConA所致肝損傷小鼠血清ALT、AST活性顯著降低(P<0.05)，結(jié)果見表1?！ ?.3茜草醇提浸膏對(duì)肝臟勻漿中細(xì)胞因子的影響與
