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《熱休克蛋白60對小鼠樹突狀細(xì)胞功能影響的論文》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、熱休克蛋白60對小鼠樹突狀細(xì)胞功能影響的論文【摘要】目的:探討動(dòng)脈粥樣硬化中重要炎性物質(zhì)——熱休克蛋白60(hsp60)體外對小鼠樹突狀細(xì)胞(mdc)功能影響。方法:小鼠骨髓提取dc,體外培養(yǎng)成熟后與兩種濃度mhsp60孵育,動(dòng)態(tài)觀察dc突起改變;流式細(xì)胞儀檢測孵育前后mdc表面標(biāo)志改變;mlr測定孵育前后mdc刺激功能變化;elisa法測定mlr上清液中細(xì)胞因子濃度。結(jié)果:孵育后,mdc突起增加明顯;cd11c+、cd80及cd86表型顯著增加;淋巴細(xì)胞刺激功能明顯增強(qiáng);分泌細(xì)胞因子il12、ifnγ增
2、加(p<0.01)而il4增加不明顯(p>0.05),ifnγ/il4比值升高。結(jié)論:mhsp60體外可以促進(jìn)mdc功能,作用呈劑量依賴性?!娟P(guān)鍵詞】熱休克蛋白60樹突狀細(xì)胞動(dòng)脈粥樣硬化表型細(xì)胞因子 effectofheatshockprotein60onmurinedendriticcellfunctioninvitro entofcardiology,unionhospital,tongjimedicalcollege,huazhonguniversityofscienceandte
3、chnology,matoryfactorinatherosclerosis,onthematurationofmurinedendriticcells(mdcs)invitro.methods:myeloidmdcsmousemarroaturehsp60.themorphologicalchangesetricanalysis;thestimulatingcapacityinedinallogenicmixedlymphocytereaction(mlr);elisadcsandstimulatedlym
4、phocyteinthemediumofmlr.results:dendritesofmhsp60dcsraisedobviously.theexpressionofcostimulatingfactorcd11c+,cd86,cd80ulatingcapacityofmhspdcsinmlrphocytescoculturedhspdcsinmlrsecretedhigherlevelsofproinflammationcytokines(ifnγ,il12)butthereulatorya
5、ctionhsp60progressedthematurationofmdcdosedependentlyinvitro. ?。踜eygmcsf和rmil4購自biosource公司;fitcantimousecd11c+、peantimousecd80及peantimousecd86購自biolegend公司;mhsp60購自stressgen公司;il4、ifnγ、il12elisa試劑盒購自rd公司。完全培養(yǎng)基包括:rpmi1640(gibco公司),20%胎牛血清(gibco公司),
6、青霉素100u/ml,鏈霉素100u/ml,20ng/mlrmgmcsf,20ng/mlrmil4?! ?.2方法 1.2.1小鼠骨髓dc培養(yǎng)參照文獻(xiàn)[4]方法稍做改進(jìn)。簡言之,取小鼠股骨和脛骨,去掉骨兩端,用5ml注射器吸取rpmi1640液沖洗髓腔,收集所得液體,200目尼龍網(wǎng)過濾后,trisnh4cl溶解紅細(xì)胞,細(xì)胞懸于20%胎牛血清rpmi1640培養(yǎng)液中,種植于50ml培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5%co2孵育箱中,過夜后,棄去懸浮細(xì)胞,再加3ml新鮮完全培養(yǎng)基,37℃、5%co2溫箱培養(yǎng),隔天半
7、量換液,每次換液均保留細(xì)胞懸液直至第9天。 1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理將培養(yǎng)第9天的細(xì)胞分為3組:①對照組:培養(yǎng)液加pbs;②高劑量組:培養(yǎng)液加mhsp6010μg/ml;③低劑量組:培養(yǎng)液加mhsp603μg/ml。3組均孵育24小時(shí)后保留細(xì)胞懸液?! ?.2.3形態(tài)觀察培養(yǎng)3、5、9和10天,用倒置顯微鏡,電鏡和fitcanticd11c+熒光染色后在熒光顯微鏡下觀察dc形態(tài)?! ?.2.4流式細(xì)胞儀檢測(fasc)收集細(xì)胞調(diào)整密度為1×106ml-1,每管為100μl,加入標(biāo)記抗體fitccd1
8、1c+、pecd80及pecd86,各0.1μg,4℃孵育20分鐘,pbs洗2遍,加入0.5mlpbs重懸,美國bectondickinson公司流式細(xì)胞儀雙標(biāo)檢測mdc的表型,以cd11c+設(shè)門,cellquest軟件分析?! ?.2.5同種混合淋巴反應(yīng)(mlr)取近交系balb/c小鼠脾臟勻漿過濾后,去除紅細(xì)胞培養(yǎng)2~3小時(shí)后取懸浮細(xì)胞,即淋巴細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞。調(diào)整淋巴細(xì)胞為105/孔,md