熱休克蛋白60對小鼠樹突狀細(xì)胞功能影響的論文

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1、熱休克蛋白60對小鼠樹突狀細(xì)胞功能影響的論文【摘要】目的：探討動(dòng)脈粥樣硬化中重要炎性物質(zhì)——熱休克蛋白60(hsp60)體外對小鼠樹突狀細(xì)胞(mdc)功能影響。方法：小鼠骨髓提取dc，體外培養(yǎng)成熟后與兩種濃度mhsp60孵育，動(dòng)態(tài)觀察dc突起改變；流式細(xì)胞儀檢測孵育前后mdc表面標(biāo)志改變；mlr測定孵育前后mdc刺激功能變化；elisa法測定mlr上清液中細(xì)胞因子濃度。結(jié)果：孵育后，mdc突起增加明顯；cd11c+、cd80及cd86表型顯著增加；淋巴細(xì)胞刺激功能明顯增強(qiáng)；分泌細(xì)胞因子il12、ifnγ增

2、加（p<0.01）而il4增加不明顯(p>0.05)，ifnγ/il4比值升高。結(jié)論：mhsp60體外可以促進(jìn)mdc功能，作用呈劑量依賴性?！娟P(guān)鍵詞】熱休克蛋白60樹突狀細(xì)胞動(dòng)脈粥樣硬化表型細(xì)胞因子　　effectofheatshockprotein60onmurinedendriticcellfunctioninvitro　　entofcardiology,unionhospital,tongjimedicalcollege,huazhonguniversityofscienceandte

3、chnology,matoryfactorinatherosclerosis,onthematurationofmurinedendriticcells(mdcs)invitro.methods:myeloidmdcsmousemarroaturehsp60.themorphologicalchangesetricanalysis;thestimulatingcapacityinedinallogenicmixedlymphocytereaction(mlr);elisadcsandstimulatedlym

4、phocyteinthemediumofmlr.results:dendritesofmhsp60dcsraisedobviously.theexpressionofcostimulatingfactorcd11c+,cd86,cd80ulatingcapacityofmhspdcsinmlrphocytescoculturedhspdcsinmlrsecretedhigherlevelsofproinflammationcytokines(ifnγ,il12)butthereulatorya

5、ctionhsp60progressedthematurationofmdcdosedependentlyinvitro.　?。踜eygmcsf和rmil4購自biosource公司；fitcantimousecd11c+、peantimousecd80及peantimousecd86購自biolegend公司；mhsp60購自stressgen公司；il4、ifnγ、il12elisa試劑盒購自rd公司。完全培養(yǎng)基包括：rpmi1640(gibco公司)，20%胎牛血清(gibco公司)，

6、青霉素100u/ml，鏈霉素100u/ml，20ng/mlrmgmcsf，20ng/mlrmil4?！　?.2方法　　1.2.1小鼠骨髓dc培養(yǎng)參照文獻(xiàn)［4］方法稍做改進(jìn)。簡言之，取小鼠股骨和脛骨，去掉骨兩端，用5ml注射器吸取rpmi1640液沖洗髓腔，收集所得液體，200目尼龍網(wǎng)過濾后，trisnh4cl溶解紅細(xì)胞，細(xì)胞懸于20%胎牛血清rpmi1640培養(yǎng)液中，種植于50ml培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%co2孵育箱中，過夜后，棄去懸浮細(xì)胞，再加3ml新鮮完全培養(yǎng)基，37℃、5%co2溫箱培養(yǎng)，隔天半

7、量換液，每次換液均保留細(xì)胞懸液直至第9天。　　1.2.2實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理將培養(yǎng)第9天的細(xì)胞分為3組：①對照組：培養(yǎng)液加pbs；②高劑量組：培養(yǎng)液加mhsp6010μg/ml；③低劑量組：培養(yǎng)液加mhsp603μg/ml。3組均孵育24小時(shí)后保留細(xì)胞懸液?！　?.2.3形態(tài)觀察培養(yǎng)3、5、9和10天，用倒置顯微鏡，電鏡和fitcanticd11c+熒光染色后在熒光顯微鏡下觀察dc形態(tài)?！　?.2.4流式細(xì)胞儀檢測（fasc）收集細(xì)胞調(diào)整密度為1×106ml-1，每管為100μl，加入標(biāo)記抗體fitccd1

8、1c+、pecd80及pecd86，各0.1μg，4℃孵育20分鐘，pbs洗2遍，加入0.5mlpbs重懸，美國bectondickinson公司流式細(xì)胞儀雙標(biāo)檢測mdc的表型，以cd11c+設(shè)門，cellquest軟件分析?！　?.2.5同種混合淋巴反應(yīng)（mlr）取近交系balb/c小鼠脾臟勻漿過濾后，去除紅細(xì)胞培養(yǎng)2～3小時(shí)后取懸浮細(xì)胞，即淋巴細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞。調(diào)整淋巴細(xì)胞為105/孔，md