資源描述：
《急性肺損傷中性粒細胞膠原酶表達異常及甲基強的松龍調(diào)控的研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、急性肺損傷中性粒細胞膠原酶表達異常及甲基強的松龍調(diào)控的研究論文陸衛(wèi)華曾尟枚許喜詠程青唐忠志【摘要】目的：探討急性肺損傷時肺組織中性粒細胞膠原酶的表達及甲基強的松龍調(diào)控關(guān)系。方法：SD大鼠45只，分為3組：1組生理鹽水正常對照組，2組內(nèi)毒素(LPS)致病組，3組內(nèi)毒素(LPS)+甲基強的松龍組。組2、組3分別由尾靜脈注射內(nèi)毒素(5mg/kg)造成大鼠急性肺損傷模型，組1則注入生理鹽水。內(nèi)毒素(LPS)+甲基強的松龍組在實驗造模前2d由腹腔注射甲基強地松龍10mg/kg，1次/d，組1、組2、組3分別于注射后6h建模后各組均取左肺標本，用免疫組織化學法檢測肺組織中中性粒
2、細胞膠原酶的表達.freelg/L苯巴比妥鈉(30mg·kg-1)麻醉,5min后經(jīng)尾靜脈注射(5mg·kg-1)LPS復制大鼠ALI模型。生理鹽水對照組注射同量生理鹽水。內(nèi)毒素(LPS)+甲基強的松龍組在實驗造模前2d由腹腔注射甲基強的松龍10mg/kg，1次/d。造模后6h分別經(jīng)靜脈注射過量的苯巴比妥鈉處死，取左下葉肺組織一塊，-70℃凍存待檢。對照組大鼠不注射LPS，處死后取左下葉肺組織。1.3測肺組織中性粒細胞膠原酶檢測采用免疫組織化學SABC法，一抗是多克隆山羊抗大鼠中性粒細胞膠原酶抗體(中山生物公司)。肺組織石蠟包埋后切片，固定于多聚賴氨酸處理過的載玻片
3、上。經(jīng)梯度乙醇脫水、脫蠟后，又經(jīng)甲醇處理5min后，封閉內(nèi)源性過氧化物酶。磷酸緩沖液(pH6．0)120℃加熱5min。滴加一抗孵育30min，然后滴加二抗，再孵育30min后，加入顯色劑DAB。細胞漿中顯棕黃色顆粒為陽性細胞，以半定量的方法判斷結(jié)果，陽性細胞定量參數(shù)用MPIAS-1000型光密度自動分析儀(Nikon，Japan)進行檢測。1.4肺組織病理損傷評分標本經(jīng)HE染色，顯微鏡下觀察。根據(jù)Tomashefski等介紹的10個觀察指標(肺泡上皮細胞破壞、毛細血管阻塞、肺間質(zhì)水腫、肺泡內(nèi)水腫、出血、單核細胞浸潤、多型核細胞浸潤、肺泡間質(zhì)水腫、透明膜形成、間質(zhì)膠
4、原降解)判斷肺損傷：分4個級別，0為未觀察到損傷、1為輕度、2為中度、3為重度。每張切片各觀察指標病理評分的總和為該切片總評分，每組觀察5張切片，取均值。1.5肺組織干/濕質(zhì)量比取左下葉肺組織稱量，70℃烘烤24h后再稱量，計算肺干/濕質(zhì)量比。1.6肺組織內(nèi)中性粒細胞計數(shù)標本經(jīng)HE染色后在400倍顯微鏡下觀察，隨機選取10個視野，用血細胞計數(shù)器計數(shù)中性粒細胞數(shù)。1.7統(tǒng)計學分析所有數(shù)據(jù)用均數(shù)方差分析，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件對各組均數(shù)進行處理，兩組間比較用t檢驗，以P0．05為差異有顯著性。2結(jié)果各組大鼠中性粒細胞膠原酶含量、中性粒細胞計數(shù)、肺干/濕質(zhì)量比、病理
5、評分結(jié)果見表1。HE染色結(jié)果顯示:C組中未見到肺組織炎癥反應見（圖1）,L組可觀察到嚴重的肺炎癥反應見（圖2）,即中性粒細胞浸潤、透明膜形成、肺泡間組織腫脹突入肺泡腔中,M組肺炎癥較L組減輕見（圖3）。中性粒細胞膠原酶染色結(jié)果顯示:C組中幾乎未見中性粒細胞膠原酶染色陽性的中性粒細胞,L組可見強陽性染色中性粒細胞,并且主要定位于細胞漿中，M組中中性粒細胞膠原酶染色陽性的中性粒細胞較L組減少。表1各組大鼠中性粒細胞膠原酶相對含量、肺病理損傷評分、肺干／濕質(zhì)量比、肺內(nèi)中性粒細胞計數(shù)3討論急性肺損傷是急性創(chuàng)傷和感染常見病。在臨床ICU所有治療病例中，由細菌內(nèi)毒素所引發(fā)的AL
6、I和急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)占有重要比例，其發(fā)病率和病死率均較高［2,3］。在對ALI的研究中，均可以觀察到有大量中性粒細胞在肺組織中聚集，而中性粒細胞可以釋放多種炎癥介質(zhì)導致ALl的發(fā)生［4,5］，因而目前對于這些炎癥介質(zhì)的研究是一個熱點。人體組織器官是由各種細胞成分及細胞外基質(zhì)(ECM)構(gòu)成，ECM是維系器官結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的基礎．在器官構(gòu)成中起"框架"作用。中性粒細胞膠原酶是基質(zhì)金屬蛋白酶中的一種，僅來源于成熟分化的中性粒細胞。中性粒細胞膠原酶能降解ECM中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原成分，而這3種膠原成分是ECM中的重要組成成分，對組織結(jié)構(gòu)起連接、支持、穩(wěn)定作用，所以，
7、在炎癥反應性疾病中，中性粒細胞膠原酶分泌增多，必然大量分解ECM中的膠原成分，造成組織器官結(jié)構(gòu)與功能破壞，持續(xù)釋放大量的毒性內(nèi)容物加劇肺損傷的病理過程，本實驗結(jié)果完全符合此結(jié)論［6,7］。本實驗結(jié)果還顯示在急性肺損傷組中性粒細胞膠原酶含量顯著高于生理鹽水正常對照組和內(nèi)毒素(LPS)甲基強的松龍組。說明急性肺損傷組中性粒細胞膠原酶含量明顯異常。內(nèi)毒素(LPS)急性肺損傷組和內(nèi)毒素(LPS)甲基強的松龍組中性粒細胞膠原酶含量差異有顯著性。內(nèi)毒素(LPS)甲基強的松龍組中性粒細胞膠原酶含量較內(nèi)毒素急性肺損傷組比例顯著減少。說明甲基強地松龍能夠調(diào)控油酸內(nèi)毒素(LPS)造
