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《中性粒細胞在大鼠急性重癥胰腺炎肺損傷中的作用機制 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、中性粒細胞在大鼠急性重癥胰腺炎肺損傷中的作用機制徐軍，劉學民，馬清涌，潘承恩【關(guān)鍵詞】急性病ExperimentalstudyonPMNinacuteseverepancreatitisorphonuclearneutrophils(PMN)frombronchoalveolarlavagefluidinacuteseverepancreatitis(ASP)andtodiscusstherelatedmechanism.METHODS:FortyeightmaleSDratsodelepoint.Atscheduledtime,bronchoalveolarlavagefluidetho
2、d.TheratioofapoptosisandnecrosisofPMNetryandLDHaseabilityeasured.RESULTS:InASPgroup,thesurvivalratioofPMNincreasedandapoptosisofPMNeabilityalsoincreased.CONCLUSION:ThedelayofPMNapoptosisleadstopersistentactivationandleakageoftoxiccontentsofPMN,acia公司產(chǎn)品，AnnexinvFITC凋亡檢測試劑盒(AnnexinvFITCApoptosisDete
3、ctionKit)系Sigma公司產(chǎn)品.采用Hitachi7170全自動生化分析儀，美國BD公司流式細胞儀FACS.calibur，Hitachi600型透射電鏡. 1.2方法 將大鼠于實驗前12h禁食，自由飲水，采用100g/L氯氨酮80mg/kgip麻醉，隨機分為實驗組及對照組，每組各24只.常規(guī)消毒，腹正中切口進入腹腔.實驗組分別于十二指腸及肝門端用小動脈夾暫時夾閉阻斷胰膽管.近肝門端用4號頭皮針穿刺胰膽管，1min內(nèi)勻速注入35g/L牛磺膽酸鈉1mL/kg,壓迫注射點，5min后去除動脈夾，逐層關(guān)閉腹腔，完成ASP模型制作.對照組僅翻動十二指腸.實驗及對照組大鼠均每8只為一時間
4、點，分別于術(shù)后3,6,12h剖殺.解剖分離肺，由主氣管插入塑料管，注入10mLPBS液，反復(fù)灌洗3次，回收液體，回收率約80％左右.灌洗液經(jīng)離心后，分別留取上清及細胞沉淀.將細胞沉淀用PBS液重新懸浮，用密度梯度離心Percoll液（密度分別為1.085和1.095）行密度梯度離心（700g4℃30min），吸取PMN富集層并進一步洗脫純化，將所獲PMN稀釋至1mL備用.肺泡灌洗液及血液乳酸脫氫酶（LDH）檢測應(yīng)用全自動生化分析儀檢測.用光鏡及電鏡觀察肺組織的病理變化.取肺泡灌洗上清液，測定白蛋白及總蛋白含量，計算白蛋白/總蛋白比值. 1.2.1PMN凋亡/壞死細胞定量取上述PMN懸浮液
5、，加500μL細胞懸液于試管中,加入5μL用異硫氰酸熒光素(FITC)標記的AnnexinV和10μL的碘化丙啶(PI)，室溫下避光放置10min，采用膜聯(lián)蛋白VFLUOS和碘化丙啶雙標法，用流式細胞儀雙通道檢測5000個細胞，激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長515,610nm.膜聯(lián)蛋白Ｖ陽性為凋亡早期細胞，PI陽性為壞死細胞，膜聯(lián)蛋白V，PI雙陽性為凋亡晚期/壞死細胞. 1.2.2肺髓過氧化物酶活性測定取肺組織加鄰聯(lián)茴香胺制成肺組織勻漿.凍融并超聲粉碎，離心后取上清加反應(yīng)液，在分光光度計460nm波長下進行2min掃描，記錄第30s和第90s的吸光度差值，以此值代表PMN的（MPO）酶活力
6、的改變. 統(tǒng)計學分析：數(shù)據(jù)以x±s表示，2組各項參數(shù)均采用方差分析進行比較.P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義. 2結(jié)果 2.1LDH含量對照組大鼠肺灌洗液中可檢測到少量的LDH,但較血中明顯減少.實驗組各時段肺灌洗液中LDH顯著增加,與對照組有顯著性差異(P0.01)，但各時間點的LDH差異不明顯.對照組大鼠血中可檢測到少量的LDH，實驗組各時段血中LDH顯著增加,與對照組有顯著性差異(P0.01),但各時間點間無明顯差異(Tab1).表1ASP各時段MPO活性及血清LDH活性（略） 2.2肺通透指數(shù)和PMN凋亡實驗組各時段肺通透指數(shù)均明顯升高，與對照組比較有顯著性差異（Tab2）.
7、對照組大鼠肺泡灌洗液中PMN的凋亡處于相對較高水平，各時間段無顯著差異.實驗組大鼠肺泡灌洗液中PMN的凋亡明顯減少，與對照組存在顯著差異(P0.01,Tab2).表2肺泡灌洗液中PMN凋亡比率、LDH活性及肺通透指數(shù)（略） 2.3肺組織MPO活性實驗組各時段與對照組相比，肺MPO活性均明顯升高，且各時段內(nèi)相互比較，肺MPO活性隨時間呈增加的趨勢，在12h段達到峰值(P0.01,Tab1). 2.4肺組織病理改變對照組
