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《中華眼鏡蛇毒對人類小涎腺腺樣囊性癌細胞株增殖周期及細胞凋亡的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中華眼鏡蛇毒對人類小涎腺腺樣囊性癌細胞株增殖周期及細胞凋亡的影響論文劉成軍，韋世秀，李牡艷，吳華，李佳荃【摘要】目的探討中華眼鏡蛇毒（Chinesecobravenom）對體外培養(yǎng)的人類小涎腺腺樣囊性癌(NACC)細胞株誘導(dǎo)凋亡的作用。方法應(yīng)用三磷酸腺苷-生物熒光腫瘤化療藥物敏感實驗法（ATP-TCA）測定細胞的生長抑制百分率，倒置相差顯微鏡、HE染色觀察細胞形態(tài)學(xué)改變，流式細胞儀分析細胞周期及細胞凋亡率。結(jié)果ATP-TCA實驗顯示眼鏡蛇毒對體外培養(yǎng)的NACC細胞生長有明顯的抑制作用，與濃度和作用時間呈正比；形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)用藥后的NACC細胞質(zhì)空泡、核固縮、核染
2、色質(zhì)聚集等形態(tài)學(xué)變化現(xiàn)象；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)眼鏡蛇毒阻滯NACC細胞生長于細胞周期的G0／G1期.freel-inducedapoptosisinNoovelHumanpalatalsalivaryglandcellsline.MethodsTheadenosinetriphospate(ATP)-bioluminescencetumorchemosensitivityassay(ATP-TCA)inethegroindifferentconcentration.Cellapoptosisetryandcellmorphology.ResultsTheexper
3、imentshocouldobviouslyinhibitthegroe-dependentmanner.ThechangesinmorphologyofNACCCelletryanalysissho.TheapoptoticratesofNACCcellstreatedgroupscaninhibitproliferationandinduceapoptosisofNACCcells.Key;NACCcell;Cellcycle;Cellapoptosis涎腺腺樣囊性癌是最常見的涎腺惡性腫瘤之一，研究有效藥物控制其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移成為目前研究的熱點。中華眼鏡蛇毒中成
4、分復(fù)雜，其主要成分有神經(jīng)毒素、細胞毒素、酶、蛋白質(zhì)及多肽等。具有多方面的藥理作用，如抗炎、抗血小板聚集、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等。隨著蛇毒毒理學(xué)、藥物學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，近年來國內(nèi)外學(xué)者越來越重視蛇毒抗腫瘤作用的研究。據(jù)報道眼鏡蛇毒在體內(nèi)體外都具有抗腫瘤作用［1～3］。而眼鏡蛇毒對NACC細胞株的作用如何，國內(nèi)外尚未見報道。在本研究中，我們嘗試應(yīng)用近年發(fā)展起來的對惡性實體腫瘤有較高可評估率的新方法三磷酸腺苷-生物熒光腫瘤化療藥物敏感實驗法（ATP-TCA法）［4］，研究眼鏡蛇毒對人類小涎腺腺樣囊性癌(NACC)細胞株的抑制作用，測定眼鏡蛇毒與癌細胞存活的量效和
5、時效關(guān)系，應(yīng)用HE染色觀察眼鏡蛇毒作用NACC細胞后細胞形態(tài)學(xué)的改變，以及流式細胞術(shù)檢測眼鏡蛇毒作用后的NACC細胞凋亡等方面的實驗，為眼鏡蛇毒的抗腫瘤臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。1材料與方法1.1藥品與儀器中華眼鏡蛇毒凍干粉（廣西醫(yī)科大學(xué)蛇毒研究所）；ATP試劑盒［德國DCS公司，包括：完全分析培養(yǎng)基（CAM）、ATP提取液、熒光素-熒光酶、稀釋緩沖液、ATP標(biāo)準(zhǔn)品、96孔檢測板、針管、過濾器、過濾膜等］;胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）;青霉素（哈藥集團制藥總廠）;鏈霉素(大連美羅大藥廠)；RPMI1640培養(yǎng)基(美國Hyclone)。微孔板式自發(fā)光分析
6、儀（德國BETHOLD公司）；水套式CO2培養(yǎng)箱（美國FORMA公司）；流式細胞儀（美國BECKMANCOULTER公司）；倒置相差顯微鏡（德國ZELSS公司）；病理圖象分析儀（德國LEICA公司）。1.2細胞株人類小涎腺腺樣囊性癌細胞株（廣西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院）。1.3人類小涎腺腺樣囊性癌細胞的培養(yǎng)將人類小涎腺腺樣囊性癌細胞按常規(guī)方法培養(yǎng)于含10%胎牛血清，青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml的RPMI1640培養(yǎng)基中，于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對數(shù)生長期人類小涎腺腺樣囊性癌細胞用0.125%胰酶消化后收集細胞懸液，細胞計數(shù)板計算細胞數(shù)，加入
7、完全分析培養(yǎng)基（CAM）制成1×105/ml細胞懸液。1.4ATP-TCA法測定人類小涎腺腺樣囊性癌細胞增殖的抑制率將眼鏡蛇毒凍干粉，用完全分析培養(yǎng)基（CAM）溶解，倍比稀釋成100，50，25，12.5，6.25μg/ml的不同濃度蛇毒溶液，每種蛇毒濃度各取100μl分別置96孔板中，每個蛇毒濃度組設(shè)4個復(fù)孔作為實驗組，并設(shè)未加蛇毒孔作為對照組。于各孔中加入1×105/ml的細胞懸液100μl，置5%CO2，37℃飽和濕度培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24，48，72，96h，然后向各孔中加入ATP提取液50μl，多次吸取混勻，避免產(chǎn)生氣泡，室溫下孵育5min。從各孔中吸取
8、50μl培養(yǎng)液，置96孔
