吳茱萸堿對涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系accm增殖和凋亡的影響

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1、目錄中文摘要????????????????????????1英文摘要????????????????????????4研究論文吳茱萸堿對涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC．M增殖和凋亡的影響前言???????????????????????8一刖舌???????????????????????材料與方法????????????????????9結(jié)果???????????????????????16附圖???????????????????????18附表???????????????????????24

2、討論???????????????????????26結(jié)論???????????????????????28參考文獻(xiàn)?????????????????????29綜述腺樣囊性癌及其治療進(jìn)展的研究???????????30致謝???????????????????????????41個人簡歷???????????????????????42中文摘要吳茱萸堿對涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC．M增殖和凋亡的影響摘要目的：涎腺腺樣囊性癌(salivaryadenoidcysticcarcinoma)是最常見的

3、惡性腫瘤之一，在口腔頜面部惡性腫瘤中居第二位。浸潤性極強和易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是腺樣囊性癌的重要特征。即使手術(shù)切除后也常有局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率在口腔頜面部居首位。涎腺腺樣囊性癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移機制目前尚不清楚。因此有必要探索新的治療方法，以期提高對腺樣囊性癌的療效，減少局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生，改善患者的生存質(zhì)量。中藥吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸干燥近成熟果實，吳茱萸堿(evodiamine)為其主要活性物質(zhì)。吳茱萸有溫中散寒，疏肝止痛之功效，常用于脘腹冷痛，嘔吐腹瀉，頭痛胃痛和痛經(jīng)等。近代醫(yī)學(xué)亦證

4、明吳茱萸有鎮(zhèn)痛，安神，抗菌，降壓，抗腫瘤等藥理作用。但是吳茱萸堿否能誘導(dǎo)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞的調(diào)亡或壞死，國內(nèi)外尚未見報道。本研究擬對體外培養(yǎng)的人涎腺腺樣囊性癌ACC．M細(xì)胞經(jīng)不同濃度、不同時間吳茱萸堿作用后，采用流式細(xì)胞術(shù)等檢測細(xì)胞凋亡情況，觀察不同濃度、不同作用時間下吳茱萸堿對ACC．M細(xì)胞系是否有誘導(dǎo)凋亡作用，探討其可能的機制。并為臨床上采用吳茱萸堿治療涎腺腺樣囊性癌提供理論依據(jù)。方法：1材料ACC．M：上海交通大學(xué)口腔頜面外科實驗室提供，建立于1995年；吳茱萸堿：中國藥品生物制品檢定所提供

5、。2方法(1)藥液配制吳茱萸堿用DMSO溶解配制成20mg／ml儲存液，使用前用培養(yǎng)液稀釋(DMSO濃度低于0．001％，對細(xì)胞無影響’l。(2)細(xì)胞培養(yǎng)：采用RPMll640培養(yǎng)基加入lO％胎牛血清和青霉素(100U／m1)、鏈霉素(100pg／m1)，于37℃、5％C02恒溫箱內(nèi)飽和濕度培養(yǎng)，24,--一，48小時傳1代，以O(shè)．04％EDTA和O．25％胰蛋白酶(1：1)混合液消化傳代。(3)MTT比色試驗：取對數(shù)生長期細(xì)胞制成2．O×107／L細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每孔100ul，培養(yǎng)2

6、4h后，加入?yún)擒镙菈A100ul，使終濃度為0．01、0．1、l、中文摘要10、100ug／ml，設(shè)對照組和調(diào)零孔，每組5個復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72h后，每孔加入59／L的MTT溶液20ul，再培養(yǎng)4h后吸去全部上清液，然后每孔加入200ul二甲基亞砜，振蕩搖勻，使結(jié)晶充分溶解，置酶標(biāo)儀上測各孔吸光度值計算生長抑制率，按作圖法求出不同處理時間的IC50(生長抑制率為50％的藥物濃度)。(4)倒置相差顯微鏡觀察：將細(xì)胞接種于50ml培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞在空白培養(yǎng)基和含藥培養(yǎng)基中不同培養(yǎng)時

7、間的生長狀況。(5)光鏡觀察：將細(xì)胞接種于6孔板中，孔中放置蓋玻片，爬片成功后加入空白或含藥培養(yǎng)基，培養(yǎng)不同時間后，瑞姬染色，光鏡觀察。(6)流式細(xì)胞術(shù)檢測：用空白培養(yǎng)基和不同濃度的含藥培養(yǎng)基處理細(xì)胞不同時間后，Annexin．V-FITC和PI雙標(biāo)記活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢澳0細(xì)胞凋亡情況。3統(tǒng)計分析使用SPSSl0．0統(tǒng)計學(xué)軟件，應(yīng)用SNK．q檢驗、相關(guān)分析以及妲檢驗對吸光度值、生長抑制率和凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果：1MTT比色試驗：吳茱萸堿(1ug／ml以上)對ACC．M細(xì)胞具有明顯的生長抑制作

8、用，藥物作用24h、48h、72h后的IC50分別為6．5ug／ml、4．5ug／ml和0．85ug／ml；最大生長抑制率可達(dá)89％。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，各時間組不同濃度之間吸光度值明顯不同(P<0．05)，各濃度用藥組不同處理時間之間生長抑制率不同(P<0．01)，藥效與藥物濃度和作用時間具有明顯的正相關(guān)性。2倒置顯微鏡觀察：對照組的細(xì)胞貼壁生長，呈扁平多角形，胞質(zhì)飽滿，靠近中央處有圓形的細(xì)胞核，細(xì)胞生長迅速，呈“鋪路石"狀生長；用藥組的細(xì)胞生長明顯減慢，并且可見有細(xì)胞脫落，貼壁的細(xì)胞