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《兔卵母細(xì)胞的超數(shù)排卵與孤雌激活論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、兔卵母細(xì)胞的超數(shù)排卵與孤雌激活論文王春雨，魯進，武浩，魏欣，趙甫濤，賈戰(zhàn)生【關(guān)鍵詞】卵母細(xì)胞Superovulationandparthenogeicactivationinrabbits【Abstract】AIM:Toexploreoptimalsuperovulatingmethodsandparthenogeicactivationconditionsinrabbits.METHODS:Virginalandmultiparousrabbitsulatinghormone(FSH)atdifferentconcentrations.Afterbeingobtained,the
2、matureoocytesbersbetonegroupsandcontrolgroup(P0.05)andbetonegroups［(15.00±1.58)vs(31.83±3.06),(31.80±3.27),P0.05］.Soultiparousrabbits.Theratesofmerogenesis（85.59％）andtheratesofdevelopmentto4-8cellstage（21.19％）ofrabbitoocytesmdirectcurrentpulsestreatmentamongthefourgroups.CONCLUSION:Thesuperovu
3、lationefficiencyinrabbitsentisoptimizedandthesuperovulationefficiencyisbetterinmultiparousrabbitsthanthatinvirginalrabbits.Theparativelysuitableoocyteactivationconditionisthatof200V/mm,40μsand2timesofdirectcurrentpulsesm組孤雌激活兔卵母細(xì)胞的卵裂率（85.59％）和4~8細(xì)胞期發(fā)育率（21.19％）最高，與240V/mm組（71.43%,10.48%）之間存在統(tǒng)計學(xué)
4、差異（P＜0.05）.結(jié)論：FSH25U及FSH80U+PVP方案均能產(chǎn)生最佳超排效果，經(jīng)產(chǎn)兔優(yōu)于青年兔；電場強度200V/mm，脈寬40μs，2次脈沖、間隔1s為兔成熟卵母細(xì)胞的較理想的激活條件.【關(guān)鍵詞】卵母細(xì)胞；孤雌激活；兔0引言治療性克?。╰herapeuticcloning）是體細(xì)胞核移植技術(shù)和胚胎干細(xì)胞技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，將成為人類醫(yī)療史上革命性的技術(shù).由于人類卵母細(xì)胞來源非常有限，且受到法律、倫理等多種因素的限制，很難獲得足夠數(shù)量的人卵母細(xì)胞用于實驗研究.異種核移植技術(shù)的出現(xiàn)為解決這一難題提供了可能.實踐證實，家兔卵母細(xì)胞可以作為異種核移植研究的理想受體，可支持人類體細(xì)
5、胞去分化并發(fā)育至囊胚期［1］.我們在以往研究工作的基礎(chǔ)上,利用本地白兔進一步探討了不同超數(shù)排卵處理方法以及不同年齡階段白兔的超排效果.目的在于篩選一種效果好、成本低的家兔超排方案，為人兔異種細(xì)胞核移植的研究提供充足的成熟兔卵母細(xì)胞.此外，我們還采用不同強度直流電脈沖對超排獲得的成熟兔卵母細(xì)胞進行孤雌激活的研究，探索最佳的激活條件，為下一步獲得人兔核移植胚胎干細(xì)胞，并向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化做準(zhǔn)備.1材料和方法1.1材料①實驗動物：體質(zhì)量2.5~3.5kg，6~18mo齡性成熟雌性本地白兔42（經(jīng)產(chǎn)兔20只，青年兔22）只，購自第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心.②主要試劑和器械:獸用垂體促卵泡素(F
6、SH)及注射用人絨毛膜促性腺素(hCG)，購自寧波激素二廠;PBS緩沖液（自配）;胎牛血清（四季青公司）;透明質(zhì)酸酶、聚乙烯吡咯酮（PVP）（Sigma）;DMEM,RPMI1640(Gibco);電融合液（自配）;解剖顯微鏡（Olympas）;電融合儀（ModelECM830,BTX,SanDiego）;外科手術(shù)器械.1.2方法1.2.1超數(shù)排卵處理將實驗兔隨機分為4組分籠飼養(yǎng)，每籠3只，喂以相同的顆粒飼料,自由飲水.實驗前15d，選擇5只8mo齡健康雄兔進行輸精管結(jié)扎手術(shù).1組11（經(jīng)產(chǎn)兔5，青年兔6）只.受試兔經(jīng)皮下注射FSH，2次/d，15U/次，連續(xù)3d，最后一次注射FS
7、H后12h，由耳緣靜脈注射hCG100U;2組10（經(jīng)產(chǎn)兔5，青年兔5）只.受試兔經(jīng)皮下注射FSH，2次/d，25U/次，連續(xù)3d，最后一次注射FSH后12h，由耳緣靜脈注射hCG100U;3組11（經(jīng)產(chǎn)兔6，青年兔5）只.參考朱華萍等［2］的實驗方法，皮下一次性注射FSH80U與250g/LPVP的混合液，3d后由耳緣靜脈注射hCG100U.對照組10（經(jīng)產(chǎn)兔4，青年兔6）只.均為正常排卵的雌兔，取卵前14~16h與結(jié)扎的雄兔1∶1合籠.1.2.2卵母細(xì)胞的回收卵母
