兔卵母細胞的超數(shù)排卵與孤雌激活

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1、兔卵母細胞的超數(shù)排卵與孤雌激活王春雨，魯進，武浩，魏欣，趙甫濤，賈戰(zhàn)生【關鍵詞】卵母細胞Superovulationandparthenogeicactivationinrabbits　　【Abstract】AIM:Toexploreoptimalsuperovulatingmethodsandparthenogeicactivationconditionsinrabbits.METHODS:Virginalandmultiparousrabbitsulatinghormone(FSH)atdifferentconcentrations.Aft

2、erbeingobtained,thematureoocytesbersbetonegroupsandcontrolgroup(P0.05)andbetonegroups〔(15.00±1.58)vs(31.83±3.06),(31.80±3.27),P0.05〕.Soultiparousrabbits.Theratesofmerogenesis（85.59％）andtheratesofdevelopmentto4-8cellstage（21.19％）ofrabbitoocytesmdirectcurrentpulsestreatmentamo

3、ngthefourgroups.CONCLUSION:Thesuperovulationefficiencyinrabbitsentisoptimizedandthesuperovulationefficiencyisbetterinmultiparousrabbitsthanthatinvirginalrabbits.Theparativelysuitableoocyteactivationconditionisthatof200V/mm,40μsand2timesofdirectcurrentpulsesm組孤雌激活兔卵母細胞的卵裂率（85

4、.59％）和4~8細胞期發(fā)育率（21.19％）最高，與240V/mm組（71.43%,10.48%）之間存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05）.結論：FSH25U及FSH80U+PVP方案均能產(chǎn)生最佳超排效果，經(jīng)產(chǎn)兔優(yōu)于青年兔；電場強度200V/mm，脈寬40μs，2次脈沖、間隔1s為兔成熟卵母細胞的較理想的激活條件.　　【關鍵詞】卵母細胞；孤雌激活；兔　　0引言　　治療性克?。╰herapeuticcloning）是體細胞核移植技術和胚胎干細胞技術相結合的產(chǎn)物，將成為人類醫(yī)療史上革命性的技術.由于人類卵母細胞來源非常有限，且受到法律、倫理等多種因素的

5、限制，很難獲得足夠數(shù)量的人卵母細胞用于實驗研究.異種核移植技術的出現(xiàn)為解決這一難題提供了可能.實踐證實，家兔卵母細胞可以作為異種核移植研究的理想受體，可支持人類體細胞去分化并發(fā)育至囊胚期〔1〕.我們在以往研究工作的基礎上,利用本地白兔進一步探討了不同超數(shù)排卵處理方法以及不同年齡階段白兔的超排效果.目的在于篩選一種效果好、成本低的家兔超排方案，為人兔異種細胞核移植的研究提供充足的成熟兔卵母細胞.此外，我們還采用不同強度直流電脈沖對超排獲得的成熟兔卵母細胞進行孤雌激活的研究，探索最佳的激活條件，為下一步獲得人兔核移植胚胎干細胞，并向肝細胞誘導分化做

6、準備.　　1材料和方法　　1.1材料　　①實驗動物：體質量2.5~3.5kg，6~18mo齡性成熟雌性本地白兔42（經(jīng)產(chǎn)兔20只，青年兔22）只，購自第四軍醫(yī)大學實驗動物中心.②主要試劑和器械:獸用垂體促卵泡素(FSH)及注射用人絨毛膜促性腺素(hCG)，購自寧波激素二廠;PBS緩沖液（自配）;胎牛血清（四季青公司）;透明質酸酶、聚乙烯吡咯酮（PVP）（Sigma）;DMEM,RPMI1640(Gibco);電融合液（自配）;解剖顯微鏡（Olympas）;電融合儀（ModelECM830,BTX,SanDiego）;外科手術器械.　　1.2方法

7、　　1.2.1超數(shù)排卵處理將實驗兔隨機分為4組分籠飼養(yǎng)，每籠3只，喂以相同的顆粒飼料,自由飲水.實驗前15d，選擇5只8mo齡健康雄兔進行輸精管結扎手術.1組11（經(jīng)產(chǎn)兔5，青年兔6）只.受試兔經(jīng)皮下注射FSH，2次/d，15U/次，連續(xù)3d，最后一次注射FSH后12h，由耳緣靜脈注射hCG100U;2組10（經(jīng)產(chǎn)兔5，青年兔5）只.受試兔經(jīng)皮下注射FSH，2次/d，25U/次，連續(xù)3d，最后一次注射FSH后12h，由耳緣靜脈注射hCG100U;3組11（經(jīng)產(chǎn)兔6，青年兔5）只.參考朱華萍等〔2〕的實驗方法，皮下一次性注射FSH80U與250g

8、/LPVP的混合液，3d后由耳緣靜脈注射hCG100U.對照組10（經(jīng)產(chǎn)兔4，青年兔6）只.均為正常排卵的雌兔，取卵前14~16h與結扎的雄兔1∶1合