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《羊卵泡卵母細(xì)胞孤雌激活研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、羊卵泡卵母細(xì)胞孤雌激活研究【摘要】目的卵母細(xì)胞孤雌激活是胚胎體外生產(chǎn)的一項(xiàng)重要技術(shù)。本試驗(yàn)通過(guò)乙醇、離子霉素和6-DMAP不同濃度和不同激活時(shí)間的優(yōu)化組合，提高孤雌激活效果和孤雌胚發(fā)育能力。方法與結(jié)果試驗(yàn)1，體外成熟的卵母細(xì)胞經(jīng)5M離子霉素或7%的乙醇激活5min，然后在6-DMAP中激活4h，6-DMAP的濃度設(shè)置為0.5mM、1.0mM、2.0mM和3.0mM；結(jié)果表明，濃度為2.0mM和3.0mM6-DMAP激活的卵母細(xì)胞卵裂率（37.50%）顯著高于其他各組（P＜0.01）。試驗(yàn)2，體外成熟的卵母細(xì)胞經(jīng)5M離子霉素激活5min，然后在2.0mM6-DMAP中激活1h、3h、5h、
2、7h和9h；結(jié)果表明，卵母細(xì)胞在6-DMAP中激活5h和7h其囊胚率（12.38%和10.48%）顯著高于其他各組（P＜0.01）。結(jié)論本研究認(rèn)為Ionomycin和乙醇為激活劑時(shí)，6-DMAP的孵育時(shí)間以5h為宜。Ionomycin比乙醇激活效果好，但乙醇與Ionomycin簡(jiǎn)單便捷?！娟P(guān)鍵詞】羊；卵母細(xì)胞；孤雌激活Thestudyonparthenogeicactivationofsheepoocytes【Abstract】Parthenogeicactivationofoocytesportanttechnologyofembyosproductioninvitro.Thisexp
3、erimentprovedevelopmentofparthenogeicembryosfolloentsofethanol，ionomycin，and6-DMAP.InExperiment1，invitromaturedoocytesycinor7%ethanolfor5minfolloM，1.0mM，2.0mMand3.0mM；TheresultshoMand3.0mM6-DMAPgroupsent2，invitromaturedoocytesycinfor5minfolloM6-DMAPfor1h，3h，5h，7hor9h;TheresultshoRNA的補(bǔ)充等一系列激活反應(yīng)，最終
4、導(dǎo)致原核的形成、DNA合成的起始和卵裂；卵母細(xì)胞孤雌激活是一種人工激活卵的方式，通過(guò)電脈沖、Ionomycin、乙醇、鈣離子載體、放線菌酮和1，4，5-三磷酸肌醇（IP3）等都可以引起卵母細(xì)胞的激活，使MII期卵母細(xì)胞不經(jīng)過(guò)受精過(guò)程完成早期胚胎發(fā)育，獲得孤雌胚胎。孤雌激活與體外受精都是以MII期卵母細(xì)胞為起點(diǎn)，都能獲得早期胚胎，但孤雌激活與體外受精存在本質(zhì)的區(qū)別；前者是人工活化卵母細(xì)胞，后者是自然活化卵母細(xì)胞；孤雌激活胚是通過(guò)抑制第二極體排放，使其與原來(lái)的卵母細(xì)胞核融合構(gòu)成二倍體的胚胎，而體外受精胚胎是由雌雄配子融合所獲得的胚胎，孤雌激活和體外受精是兩項(xiàng)相對(duì)獨(dú)立的技術(shù)但又有密切的聯(lián)系。目
5、前大部分哺乳動(dòng)物體外受精產(chǎn)生胚胎的發(fā)育率和妊娠率都比較低，但有試管動(dòng)物相繼誕生；孤雌生殖的動(dòng)物個(gè)體僅獲得早期胚胎，還沒(méi)有妊娠成功的報(bào)道。本研究針對(duì)影響孤雌激活的主要因素，比較了Ionomycin、乙醇與6-DMAP對(duì)成熟卵母細(xì)胞的激活效果，旨在建立一套快速、便捷的卵母細(xì)胞體外激活方法，提高孤雌激活的效果與可操作性。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1主要儀器體視顯微鏡：日本NICON，SMZ800-C-EPI；CO2培養(yǎng)箱：美國(guó)，F(xiàn)ormascientific3336型；雙人單面垂直流超凈臺(tái)：上海，ZHJH-1115。1.1.2試劑與耗材一次性塑料培養(yǎng)皿為Nunclon公司產(chǎn)品；培養(yǎng)用T
6、CM199和胎牛血清（FBS）由Gibco公司生產(chǎn)，其他所有化學(xué)試劑除特別指明外，均為Sigma公司生產(chǎn)；FSH、LH和17-E2購(gòu)自寧波激素制品公司。1.1.3操作液1.1.3.1卵母細(xì)胞成熟液TCM-199，HEPES10mM，丙酮酸鈉0.38mM，F(xiàn)BS10%，17-E21g/ml，LH20g/ml，F(xiàn)SH10μg/ml，青霉素100U/ml，硫酸鏈霉素100U/ml。1.1.3.2胚胎培養(yǎng)液SOFaa胚胎培養(yǎng)液為基礎(chǔ)液，另加HEPES10mM，5%FBS，EDTA0.1mM，青霉素100U/ml，硫酸鏈霉素100U/ml。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1卵母細(xì)胞成熟與孤雌激活前處理卵母細(xì)
7、胞采集后成熟培養(yǎng)23～24h后，去除卵母細(xì)胞外的所有卵丘細(xì)胞，挑選明顯具有第一極體的成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌激活試驗(yàn)。1.2.2孤雌胚體外培養(yǎng)各種處理后的卵母細(xì)胞放入預(yù)先制備好的顆粒細(xì)胞單層的胚胎培養(yǎng)液微滴內(nèi)進(jìn)行共培養(yǎng)，每48h半量換液1次。1.2.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果統(tǒng)計(jì)本研究針對(duì)用于卵母細(xì)胞孤雌激活的兩種常用方法，比較了Ionomycin、乙醇與6-DMAP不同濃度組合對(duì)卵母細(xì)胞激活效果的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)具體如下。實(shí)驗(yàn)1：Ionomyci
