姜黃素對mpp+誘導pc12細胞凋亡的抑制作用

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1、姜黃素對MPP+誘導PC12細胞凋亡的抑制作用陳靜,李波,李紅軍,肖長義【摘要】目的觀察姜黃素(Curcumin,Cur)對MPP+誘導的PC12細胞凋亡的影響,并且探討其作用機理。方法采用MTT法檢測細胞存活率,碘化丙啶染色流式細胞術(shù)(FCM)檢測PC12細胞凋亡,羅丹明123染色FCM檢測細胞線粒體膜電位(△Ψm),雙氫羅丹明123染色FCM檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量。結(jié)果不同濃度MPP+作用PC12細胞24h后,細胞存活率顯著下降(P<0.01),與單純MPP+處理組比較,20μmo

2、l/LCur和不同濃度的MPP+同時處理PC12細胞24h后,細胞存活率顯著升高(P<0.01);一定濃度的Cur對PC12細胞作用24h后無明顯凋亡誘導作用,但可使MPP+處理組細胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/LCur可抑制MPP+引起的PC12細胞△Ψm降低及細胞內(nèi)ROS含量增多。結(jié)論姜黃素可以抑制MPP+誘導的PC12細胞凋亡,其作用機理可能與維持線粒體正常膜電位,穩(wěn)定線粒體功能,清除ROS有關(guān)?!娟P(guān)鍵詞】姜黃素;1-甲基-4-苯基-吡啶;細胞凋亡;活性氧;帕金森病  

3、Abstract:ObjectiveToinvestigatethecytopretectionofcurcumin(Cur)againstPC12cellapoptosisinducedby1-methyl-4-phenylpyridium(MPP+)andthemechanisms.MethodsAMTTassayetry(FCM)ine123stainingeasurethemitochondrialpotential(△Ψm),dihydrohodamine123(DHR)stainingFC

4、Mol/LCurinbinationol/LCurcouldpreventthedecreaseof△ΨmandtheelevationofROSinducedbyMPP+.ConclusionCurcaninhibitthePC12cellsapoptosisinducedbyMPP+,itsmechanismmaybeassociatedaintenanceof△ΨmandremovalROS.  Keyin;1-methyl-4-phenylpyridium;apoptosis;reactive

5、oxygnspecies;Parkinsondisease  帕金森?。≒arkinson’sdisease,PD)是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,形態(tài)學研究表明PD病人腦內(nèi)多巴胺(Dopamine,DA)能神經(jīng)元呈凋亡樣改變,提示細胞凋亡可能參與了PD的發(fā)病過程[1],但其具體機理尚未完全明了,目前認為可能與線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激反應(yīng)增強導致活性氧(ROS)過多有關(guān)。目前還沒有根治帕金森病的有效方法,現(xiàn)有的主要治療方法只能在發(fā)病初期緩解癥狀,隨著用藥時間的延長,藥效逐漸下降,并且常常出現(xiàn)嚴重的副

6、作用[2]。因此現(xiàn)在研制和開發(fā)療效高、副作用少、能真正阻止病程發(fā)展的治療藥物是臨床迫切需要解決的問題。    近年來天然藥物在治療神經(jīng)退行性病中的作用已經(jīng)引起各國學者的廣泛關(guān)注。姜黃(CurcumalongaL)是一種多年生的草本植物,在亞洲的熱帶地區(qū)廣為栽培。Cur是從姜黃根莖中提取的一種酚性色素,是姜黃的重要活性成分,具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、降血脂等廣泛的藥理作用,但在保護神經(jīng)元方面的研究少見?! ?-甲基-4-苯基-吡啶(1-methyl-4-phenylpyridium,MPP+)可以引起大

7、鼠腦DA能神經(jīng)元凋亡,成功復制PD模型。大鼠嗜鉻細胞瘤細胞系(Pheochromocytoma,PC12)在細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上與神經(jīng)元極其相似,能與原代培養(yǎng)的神經(jīng)細胞說明一致的問題,并且其含有的膜受體及合成的遞質(zhì)與黑質(zhì)DA能神經(jīng)元相似,因此該細胞株可作為DA能神經(jīng)元模型。所以MPP+制備的PC12細胞模型常作為研究PD的細胞模型[3]。本試驗小組選擇MPP+誘導PC12細胞凋亡,復制PD模型,觀察Cur對MPP+誘導的PC12細胞凋亡的抑制作用,并對其可能的作用機理進行初步探討,為今后深入研究Cu

8、r在治療PD中的作用及其機理提供實驗依據(jù),也為研發(fā)天然抗PD藥物提供新思路和新方法。  1材料與方法  1.1試劑Cur,MPP+,四氮唑藍(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5diphenyltetrazoliumbromide,MTT),碘化丙啶(Propidiumiodide,PI),羅丹明123(Rhodamine123,Rh123),雙氫羅丹明123(Dihydrohodamine123,DHR),二甲基亞砜(Dim

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