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《姜黃素對(duì)mpp誘導(dǎo)pc12細(xì)胞凋亡的抑制作用.doc》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線(xiàn)閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、n(Cur)againstPC12cdbyl-methyl-4-phendthemechanisms.MsusedtodetecttheceainingflowcytometrlyzethePC12cellapoprobeofrhodaminel2measurethemitochon),dihydrohodaminelwasusedtodetectthe姜黃素對(duì)MPP+誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的抑制作用作者:陳靜,李波,李紅軍,肖長(zhǎng)義【摘要】目的觀察姜黃素(Curcumin,Cur)對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的影響,并且探討其作用機(jī)理。方法采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,碘化丙啶染
2、色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)PC12細(xì)胞凋亡,羅丹明123染色FCM檢測(cè)細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位,雙氫羅丹明123染色FCM檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量。結(jié)果不同濃度MPP+作用PC12細(xì)胞24h后,細(xì)胞存活率顯著下降(P【關(guān)鍵詞】姜黃素;1-甲基_4-苯基-吡啶;細(xì)胞凋亡;活性氧;帕金森病Abstract:ObjectiveToinvestigatethecytopretectionofcurcumiellapoptosisinduceylpyridium(MPP+)anethodsAMTTassaywallvitality,andPIsty(FCM)wasusedtoanaptosis,fl
3、uorescent3stainingwasusedtodrialpotential(△少m23(DHR)stainingFCM1evelsofreactiveoxResultsPC12cellswygenspecies(ROS).ereexposedtodifferentconcentrationsofMPP+for24hours.Thecellsvitalitydecreasedsignifleantly(P帕金森病是一種常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,形態(tài)學(xué)研究表明PD病人腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元呈凋亡樣改變,提示細(xì)胞凋亡可能參與了PD的發(fā)病過(guò)程[1],但其具體機(jī)理尚未完全明了,目前認(rèn)
4、為可能與線(xiàn)粒體功能障礙、氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)導(dǎo)致活性氧(ROS)過(guò)多有關(guān)。目前還沒(méi)有根治帕金森病的有效方法,現(xiàn)有的主要治療方法只能在發(fā)病初期緩解癥狀,隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng),藥效逐漸下降,并且常常出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用[2]。因此現(xiàn)在研制和開(kāi)發(fā)療效高、副作用少、能真正阻止病程發(fā):的治療藥物是臨床迫切需要解決的問(wèn)題近年來(lái)天然藥物在治療神經(jīng)退行性病中的作用已經(jīng)引起各國(guó)學(xué)者的廣泛關(guān)注。姜黃是一種多年生的草本植物,在亞洲的熱帶地區(qū)廣為栽培。Cur是從姜黃根莖中提取的一種酚性色素,是姜黃的重要活性成分,具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、降血脂等廣泛的藥理作用,但在保護(hù)神經(jīng)元方面的研究少見(jiàn)。1-甲基-4-苯基-吡
5、啶可以引起大鼠腦DA能神經(jīng)元凋亡,成功復(fù)制PD模型。大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系在細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上與神經(jīng)元極其相似,能與原代培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞說(shuō)明一致的問(wèn)題,并且其含有的膜受體及合成的遞質(zhì)與黑質(zhì)DA能神經(jīng)元相似,因此該細(xì)胞株可作為DA能神經(jīng)元模型。所以MPP+制備的PC12細(xì)胞模型常作為研究PD的細(xì)胞模型[3]。本試驗(yàn)小組選擇MPP+誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡,復(fù)制H)模型,觀察Cur對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的抑制作用,并對(duì)其可能的作用機(jī)理進(jìn)行初步探討,為今后深入研究Cur在治療PD中的作用及其機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為研發(fā)天然抗PD藥物提供新思路和新方法。1材料與方法試劑Cur,MPP
6、+,四氮p坐藍(lán),硬化丙陡(Propidiumiodide,PI),羅丹明123,雙氫羅丹明123,二甲基亞砜購(gòu)自Sigma公司;RPMI-1640培養(yǎng)基,馬血清和胎牛血清購(gòu)自GibcoBRL公司;胰蛋白酶購(gòu)自華美生物試劑公司。儀器流式細(xì)胞儀,美國(guó)BECKMAN-COULTER公司產(chǎn)品;倒置熒光顯微鏡,日本Olympus公司產(chǎn)品;二氧化礎(chǔ)孵箱,HeraCell公司產(chǎn)品;離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品。細(xì)胞培養(yǎng)和藥物處理PC12細(xì)胞株置于含10%馬血清、5%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,于37°C、5%C02條件下培養(yǎng)。在細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期加入藥物處理,實(shí)驗(yàn)分組為:①空白對(duì)照組(
7、control):在細(xì)胞培養(yǎng)體系中不加入任何藥物;②Cur組:在細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入Cur;③MPP+組:在細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入MPP+;④Cur加MPP+組:在細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入Cur和MPP+。各實(shí)驗(yàn)組設(shè)三個(gè)平行對(duì)照。MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,以X105/m1接種于96孔培養(yǎng)板,100ul/孔。在37°C、5%C02條件下培養(yǎng)過(guò)夜后,按分組要求給以不同處理因素。培養(yǎng)24h后,每孔加5mg/mlMTT2OpI,再培養(yǎng)4h,傾去培養(yǎng)液,加DMS0150U1/孔,待甲