四種甘草對人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用的比較研究論文

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1、四種甘草對人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用的比較研究論文【摘要】目的比較新疆四種野生甘草活性成分對人乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用，以期篩選出藥效最佳的甘草種類。方法采用MTT法檢測不同樣品對BCAP37細(xì)胞的增殖抑制作用，Hoechst33258熒光染色法檢測各樣品誘導(dǎo)BCAP37細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果4種甘草的活性成分對人乳腺癌BCAP37細(xì)胞具有顯著的增殖抑制與誘導(dǎo)凋亡的作用，且存在顯著的種間與產(chǎn)地間差異。結(jié)論抗癌藥效最佳的甘草種類為阿拉爾甘草。【關(guān)鍵詞】甘草活性成分人乳腺癌BCAP37細(xì)胞parativeStudyontheAnti-prol

2、iferationandApoptosis-inducingEffectsofActiveponentsfromFourGlycyrrhizaSpeciesonHumanBreastCancerBCAP-37CellAbstract:ObjectiveToselecttheoptimalglycyrrhizaspeciesformedicinalutilizationbyparingtheanti-proliferationandapoptosis-inducingeffectsofactiveponentsfromfouranbreastcance

3、rBCAP37cell.MethodsTheanti-proliferationeffectsofdifferentsamplesonBCAP37celleasuredbyMTTassay.Thecellapoptoticrateore,therealGlycyrrhizaspeciesforanticancerutilizationisGlycyrrhizaalalensisL.KeyanbreastcancerBCAP37Cell甘草是我國十分重要的中藥材，素有“十方九草”的美譽(yù)。近年來，隨著對甘草開發(fā)利用的不斷深入，甘草被廣泛用于藥品、食

4、品、保健品、化妝品等領(lǐng)域［1］，甘草的市場需求量劇增。我國是世界上甘草出口大國.freela公司；順鉑(DDP)，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司；Hoechst33258染色試劑盒，碧云天生物技術(shù)研究所。1.3.2儀器CO2培養(yǎng)箱，美國（Forma）；Metertech∑960自動(dòng)酶標(biāo)儀；熒光顯微鏡，OlympusBX51；超凈工作臺(tái)，上海凈化設(shè)備廠；血球記數(shù)板，上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠。2方法2.1實(shí)驗(yàn)樣品采集與處理采集株齡一致(根莖粗細(xì)相等)的4種甘草的根莖材料，立即放入80℃烘箱中烘干至恒重，然后用藥材粉碎機(jī)將其粉碎成粉末，過100目篩，備用。2.2甘草活

5、性成分的制備2.2.1甘草水提物準(zhǔn)確稱取1.0g甘草根莖干粉加10ml蒸餾水于室溫下放置48h，12000r/min離心10min，0.22μm微孔濾膜過濾除菌，加樣前用細(xì)胞培養(yǎng)液根據(jù)文獻(xiàn)［11］將不同樣品配制成含甘草酸為1200μg/ml的受試樣品。2.2.2甘草總黃酮準(zhǔn)確稱取1.0g甘草根莖粉末，用250ml無水乙醇加5滴濃鹽酸溶液為提取劑在索氏提取器中于95℃的水浴加熱條件下提取6h，濃縮至30ml，0.22μm微孔濾膜過濾除菌，加樣前用細(xì)胞培養(yǎng)液根據(jù)文獻(xiàn)［11］將不同樣品配制成含總黃酮為50μg/ml的受試樣品。2.3細(xì)胞培養(yǎng)BCAP-3

6、7細(xì)胞用含10％滅活小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，加入NaHCO32g/L，谷氨酰胺0.24g/L，Hepes2.4g/L，青霉素100U/ml，鏈霉素100mg/ml，置于37℃,5％CO2孵箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞均處于對數(shù)生長期，常規(guī)臺(tái)酚藍(lán)計(jì)數(shù)活細(xì)胞大于95％。2.4細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)(MTT法)將處于對數(shù)生長期的BCAP37細(xì)胞用胰蛋白酶消化后,制成2.0×105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液,然后以每孔100μl接種到96孔板上,在37℃，5%CO2孵箱中培養(yǎng)24h后更換培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組加入不同的受試樣品100μl，終濃度分別為：甘草水提物中甘草酸濃度為

7、600μg/ml，甘草總黃酮25μg/ml，每一樣品均設(shè)8個(gè)平行孔，陽性對照組加入順鉑100μl：終濃度50μg/ml，空白對照組加入等體積的培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)24h,48h及72h后，每孔加入20μlMTT溶液(濃度為5mg/ml)，輕振培養(yǎng)板，放回培養(yǎng)箱內(nèi)再孵育4h后，吸盡上清液，每孔中加二甲基亞砜150μl，振蕩器上振蕩10min,用酶標(biāo)儀檢測各孔吸光度（OD值）測定波長λ=570nm。抑制率計(jì)算公式為：抑制率(％)=〔(對照組OD值－實(shí)驗(yàn)組OD值)/對照組OD值〕×100％。2.5細(xì)胞凋亡率實(shí)驗(yàn)取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡20min，0.

8、9%NaCl溶液洗滌3次，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌1次。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞，培養(yǎng)過夜，使約為50%～8