四種甘草對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用的比較研究

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1、四種甘草對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用的比較研究【摘要】目的比較新疆四種野生甘草活性成分對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用，以期篩選出藥效最佳的甘草種類。方法采用MTT法檢測(cè)不同樣品對(duì)BCAP37細(xì)胞的增殖抑制作用，Hoechst33258熒光染色法檢測(cè)各樣品誘導(dǎo)BCAP37細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果4種甘草的活性成分對(duì)人乳腺癌BCAP37細(xì)胞具有顯著的增殖抑制與誘導(dǎo)凋亡的作用，且存在顯著的種間與產(chǎn)地間差異。結(jié)論抗癌藥效最佳的甘草種類為阿拉爾甘草?！娟P(guān)鍵詞】甘草活性成分人乳腺癌BCAP37細(xì)胞　　parativeStudyon

2、theAnti-proliferationandApoptosis-inducingEffectsofActiveponentsfromFourGlycyrrhizaSpeciesonHumanBreastCancerBCAP-37Cell　　Abstract:ObjectiveToselecttheoptimalglycyrrhizaspeciesformedicinalutilizationbyparingtheanti-proliferationandapoptosis-inducingeffectsofactivepo

3、nentsfromfouranbreastcancerBCAP37cell.MethodsTheanti-proliferationeffectsofdifferentsamplesonBCAP37celleasuredbyMTTassay.Thecellapoptoticrateore,therealGlycyrrhizaspeciesforanticancerutilizationisGlycyrrhizaalalensisL.　　KeyanbreastcancerBCAP37Cell甘草是我國(guó)十分重要的中藥材，素有

4、“十方九草”的美譽(yù)。近年來(lái)，隨著對(duì)甘草開發(fā)利用的不斷深入，甘草被廣泛用于藥品、食品、保健品、化妝品等領(lǐng)域［1］，甘草的市場(chǎng)需求量劇增。我國(guó)是世界上甘草出口大國(guó)，其中80％為野生甘草，僅有20％為栽培甘草。我國(guó)甘草儲(chǔ)量銳減，由建國(guó)初期200～250萬(wàn)噸下降到50～70萬(wàn)噸［2］?，F(xiàn)存的野生甘草資源已無(wú)法滿足日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求，因此，人工栽培甘草勢(shì)在必行，野生優(yōu)質(zhì)甘草品種的篩選顯得尤為緊迫。甘草的品質(zhì)高低最終要以其藥效來(lái)衡量，前人僅以活性成分含量為指標(biāo)對(duì)甘草品質(zhì)進(jìn)行的研究是片面的［3～7］。甘草中最重要的兩大類活性成分甘草酸類和甘

5、草黃酮類化合物均具有抗炎、抗病毒及抗腫瘤之功效［8,9］，甘草的抗腫瘤活性尤其受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。乳腺癌是全球婦女最常見的惡性腫瘤。新近報(bào)告，美國(guó)女性乳腺癌的發(fā)病率已躍升為1/7，而在我國(guó)過(guò)去10年中，乳腺癌發(fā)病率也上升了27%，乳腺癌業(yè)已成為威脅婦女生命和健康的頭號(hào)殺手［10］。因此，本文研究了新疆的脹果甘草GlycyrrhizainflataBatal.，光果甘草G.glabraL.，阿拉爾甘草G.alalensisL.和黃甘草G.eurycarpaL.等4種野生甘草的甘草水提物和甘草總黃酮對(duì)人乳腺癌BCAP37細(xì)胞的

6、增殖抑制作用，以期篩選出藥效最佳的甘草栽培種類，為優(yōu)質(zhì)甘草的規(guī)模化人工種植奠定基礎(chǔ)，為甘草抗癌新藥物的研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)?！　?器材　　1.1細(xì)胞株人乳腺癌BCAP37細(xì)胞株由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫(kù)提供。　　1.2實(shí)驗(yàn)樣品各樣品采樣地點(diǎn)及樣品名稱見表1。所有樣品經(jīng)石河子大學(xué)李學(xué)禹先生鑒定為真品。表1采樣地點(diǎn)及樣品名稱（略）　　1.3試劑與儀器　　1.3.1試劑RPMI1640培養(yǎng)基,Gibco公司；小牛血清,杭州四季青生物工程材料有限公司；HEPES，華美生物工程公司；胰蛋白酶，上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司；四噻唑藍(lán)

7、(MTT)、二甲基亞砜(DMSO),Sigma公司；順鉑(DDP)，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司；Hoechst33258染色試劑盒，碧云天生物技術(shù)研究所?！　?.3.2儀器CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)（Forma）；Metertech∑960自動(dòng)酶標(biāo)儀；熒光顯微鏡，OlympusBX51；超凈工作臺(tái)，上海凈化設(shè)備廠；血球記數(shù)板，上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠?！　?方法　　2.1實(shí)驗(yàn)樣品采集與處理采集株齡一致(根莖粗細(xì)相等)的4種甘草的根莖材料，立即放入80℃烘箱中烘干至恒重，然后用藥材粉碎機(jī)將其粉碎成粉末，過(guò)100目篩，備用?！　?.2甘草活性成分

8、的制備　　2.2.1甘草水提物準(zhǔn)確稱取1.0g甘草根莖干粉加10ml蒸餾水于室溫下放置48h，12000r/min離心10min，0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，加樣前用細(xì)胞培養(yǎng)液根據(jù)　　3結(jié)果甘草活性成分對(duì)BCAP37細(xì)胞的增殖抑制率（％）結(jié)果見表2。經(jīng)Hoechst33