四種甘草對人乳腺癌細胞增殖抑制和誘導凋亡作用的比較研究

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1、四種甘草對人乳腺癌細胞增殖抑制和誘導凋亡作用的比較研究【摘要】目的比較新疆四種野生甘草活性成分對人乳腺癌細胞的增殖抑制作用，以期篩選出藥效最佳的甘草種類。方法采用MTT法檢測不同樣品對BCAP37細胞的增殖抑制作用，Hoechst33258熒光染色法檢測各樣品誘導BCAP37細胞凋亡的作用。結(jié)果4種甘草的活性成分對人乳腺癌BCAP37細胞具有顯著的增殖抑制與誘導凋亡的作用，且存在顯著的種間與產(chǎn)地間差異。結(jié)論抗癌藥效最佳的甘草種類為阿拉爾甘草?！娟P(guān)鍵詞】甘草活性成分人乳腺癌BCAP37細胞　　parativeStudyon

2、theAnti-proliferationandApoptosis-inducingEffectsofActiveponentsfromFourGlycyrrhizaSpeciesonHumanBreastCancerBCAP-37Cell　　Abstract:ObjectiveToselecttheoptimalglycyrrhizaspeciesformedicinalutilizationbyparingtheanti-proliferationandapoptosis-inducingeffectsofactivepo

3、nentsfromfouranbreastcancerBCAP37cell.MethodsTheanti-proliferationeffectsofdifferentsamplesonBCAP37celleasuredbyMTTassay.Thecellapoptoticrateore,therealGlycyrrhizaspeciesforanticancerutilizationisGlycyrrhizaalalensisL.　　KeyanbreastcancerBCAP37Cell甘草是我國十分重要的中藥材，素有

4、“十方九草”的美譽。近年來，隨著對甘草開發(fā)利用的不斷深入，甘草被廣泛用于藥品、食品、保健品、化妝品等領域［1］，甘草的市場需求量劇增。我國是世界上甘草出口大國，其中80％為野生甘草，僅有20％為栽培甘草。我國甘草儲量銳減，由建國初期200～250萬噸下降到50～70萬噸［2］。現(xiàn)存的野生甘草資源已無法滿足日益增長的市場需求，因此，人工栽培甘草勢在必行，野生優(yōu)質(zhì)甘草品種的篩選顯得尤為緊迫。甘草的品質(zhì)高低最終要以其藥效來衡量，前人僅以活性成分含量為指標對甘草品質(zhì)進行的研究是片面的［3～7］。甘草中最重要的兩大類活性成分甘草酸類和甘

5、草黃酮類化合物均具有抗炎、抗病毒及抗腫瘤之功效［8,9］，甘草的抗腫瘤活性尤其受到國內(nèi)外學者的關(guān)注。乳腺癌是全球婦女最常見的惡性腫瘤。新近報告，美國女性乳腺癌的發(fā)病率已躍升為1/7，而在我國過去10年中，乳腺癌發(fā)病率也上升了27%，乳腺癌業(yè)已成為威脅婦女生命和健康的頭號殺手［10］。因此，本文研究了新疆的脹果甘草GlycyrrhizainflataBatal.，光果甘草G.glabraL.，阿拉爾甘草G.alalensisL.和黃甘草G.eurycarpaL.等4種野生甘草的甘草水提物和甘草總黃酮對人乳腺癌BCAP37細胞的

6、增殖抑制作用，以期篩選出藥效最佳的甘草栽培種類，為優(yōu)質(zhì)甘草的規(guī)?；斯しN植奠定基礎，為甘草抗癌新藥物的研發(fā)提供科學依據(jù)。　　1器材　　1.1細胞株人乳腺癌BCAP37細胞株由中國科學院上海細胞生物學研究所細胞庫提供。　　1.2實驗樣品各樣品采樣地點及樣品名稱見表1。所有樣品經(jīng)石河子大學李學禹先生鑒定為真品。表1采樣地點及樣品名稱（略）　　1.3試劑與儀器　　1.3.1試劑RPMI1640培養(yǎng)基,Gibco公司；小牛血清,杭州四季青生物工程材料有限公司；HEPES，華美生物工程公司；胰蛋白酶，上海藍季科技發(fā)展有限公司；四噻唑藍

7、(MTT)、二甲基亞砜(DMSO),Sigma公司；順鉑(DDP)，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司；Hoechst33258染色試劑盒，碧云天生物技術(shù)研究所?！　?.3.2儀器CO2培養(yǎng)箱，美國（Forma）；Metertech∑960自動酶標儀；熒光顯微鏡，OlympusBX51；超凈工作臺，上海凈化設備廠；血球記數(shù)板，上海醫(yī)用光學儀器廠?！　?方法　　2.1實驗樣品采集與處理采集株齡一致(根莖粗細相等)的4種甘草的根莖材料，立即放入80℃烘箱中烘干至恒重，然后用藥材粉碎機將其粉碎成粉末，過100目篩，備用?！　?.2甘草活性成分

8、的制備　　2.2.1甘草水提物準確稱取1.0g甘草根莖干粉加10ml蒸餾水于室溫下放置48h，12000r/min離心10min，0.22μm微孔濾膜過濾除菌，加樣前用細胞培養(yǎng)液根據(jù)　　3結(jié)果甘草活性成分對BCAP37細胞的增殖抑制率（％）結(jié)果見表2。經(jīng)Hoechst33