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《sec對淋巴細胞分泌tnf-α的誘導(dǎo)作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、SEC對淋巴細胞分泌TNF-α的誘導(dǎo)作用安徽醫(yī)學(xué)2006年第27卷第5期SEC對淋巴細胞分泌TNF一')【的誘導(dǎo)作用王凡黃強周麗英[摘要]目的探討超抗原SEC的抗癌作用機制.方法采用ELISA法測定SEC在不同濃度及作用時間促淋巴細胞分泌TNF—a的作用;采用RT—PCR法檢測SEC在不同作用時間促進淋巴細胞表達TNF—a的mRNA.結(jié)果ELISA法顯示:淋巴細胞在未經(jīng)SEC激活之前,培養(yǎng)上清液中TNF—a較低,經(jīng)SEC激活后的第1天,培養(yǎng)上清液中TNF—a迅速上升,到作用的第3天,TNF—a上升至峰值.RT—PCR顯示:經(jīng)SEC
2、活化的淋巴細胞有大量TNF—amRNA的表達,高峰出現(xiàn)于第3天.結(jié)論SEC能促進淋巴細胞大量分泌TNF—a.[關(guān)鍵詞]金葡菌腸毒素C;超抗原;淋巴細胞;腫瘤壞死因子一aTunlornecrosisllact0lr—OtsecretionoflymphocytestimulatedbySECWangFan,HuangQ,ZhouUyingDepartmentofRadiationOncology,FirstAffiliatedHospital,AnhuiMedicalUmvershy,Hefei230022[Abstrad]Obje
3、ctiveProbetoantitumormechanismofsuperantigenSEC.Me~odsWemeasuredl'NF—ainlym-phocytestimulatedbySEC(indifferentdoseandtime)withELISAmethod;mRNAexpressionwasmeasuredbyusingRT—PCR.ResultsAPAAPshows:ThereislittleINF—abeforeusingSEC.ThelymphocytestimulatedbySECbegantosecre
4、teINF—ctgreatlyatfirstday.Secretingamountreachedpeakatthethirddayanddecreasedslowlyatthe5,7,hday;RT—PCRshows:LymphocyteactivatedhaveexpressedmRNAofl'NF—a,contrasttothis,thelymphocyteunaetivateddidnotexpressedanymRNAofeytokine.ConclusionSECCaninducelymphocytetosecreteI
5、NF—a[Keywords]Staphylococcalenterotoxin;Superantigen;Lymphocyte;Tumornecrosisfactor—a生物治療現(xiàn)已被公認為除手術(shù),放療和化療外的第四種腫瘤治療手段.高聚生作為一種超抗原…,經(jīng)動物實驗及人體臨床試驗,均顯示出強大的抗瘤作用.本文通過觀察金葡菌腸毒素C型(staphylococ.calenterotoxinC,SEC)對淋巴細胞分泌TNF一僅的誘導(dǎo)作用,試圖對SEC高聚生的抗瘤作用機制進行闡明.資料與方法1.儀器相差顯微鏡:Nikon,日本.二氧化碳培
6、養(yǎng)箱,ESOEC—BAN一311型,日本.離心機:LIM一2A,北京醫(yī)用離心機廠.DNA熱循環(huán)儀:PE公司.電泳儀:TS600,上海復(fù)旦生物工程研究所.全自動酶聯(lián)免疫檢測儀:HYPERION,USA.2.主要試劑SEC,沈陽協(xié)合制藥廠.Ficoll—Hypaque淋巴細胞分離液,比重1.077±±0.022,上海試劑二廠.RPMI1640培養(yǎng)液,Sigma公司.小牛血清,杭州四季青生物工程材料研究所.RNA抽提試劑TRIZOL及cDNA合成試劑盒,GIBCOBRL公司產(chǎn)品.357高保真Taq酶及dNTPS,Sigma公司產(chǎn)品.TF
7、N一僅檢測試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司.3.淋巴細胞的分離培養(yǎng)及活動取健康志愿者靜脈血50na(肝素1250U),100mlPBS稀釋,小心加人到等體積的淋巴細胞分離液,2000r/min離心20分鐘,小心吸出中層的外周血單個核細胞(peripheralbloodmononuclearcel1)層,加5倍PBS稀釋,1000r/min離心5分鐘,棄上清,將沉淀置于RPMI1640完全培養(yǎng)基(含20%小牛血清,青鏈霉素各100U/m1)37℃50%CO:飽和濕度下培養(yǎng),在上述培養(yǎng)基中加人SEC,使其終濃度分別為10U/ml,5
8、U/ml,2.5U/Tnl,0u/Tnl.于用藥前及用藥后的第1,3,5,7天離心,收集上清液及淋巴細胞,分別置于一20℃及一80℃冰箱保存?zhèn)溆?4.ELISA檢測淋巴細胞上清液TNF一采用雙抗體夾心法,取出已平衡至室溫的板條,加人標準品稀釋液10
