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1、授予單位代碼10089m學(xué)號或申請?zhí)?36%HebeiMedicalUniversity碩士學(xué)位論文在職科學(xué)學(xué)位X-射線通過誘導(dǎo)TNF-a的產(chǎn)生促進(jìn)DC疫苗的抗腫瘤作用學(xué)位申請人：王之瑜導(dǎo)師：宋淑霞教授專業(yè)：免疫學(xué)二級學(xué)院：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2015年3月河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申
2、報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則,承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名：導(dǎo)師簽二級學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：?丨;r年丨月彡曰河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外,文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果,指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫,文責(zé)自負(fù)。研究生簽名導(dǎo)師簽章：東孤聲年《月j曰目錄中文摘要…………………………………………………………………..1英文摘要…………………………………………………………………..6英文縮寫…………………………………………
3、………………………..14研究論文X-射線通過誘導(dǎo)TNF-α的產(chǎn)生促進(jìn)DC疫苗的抗腫瘤作用前言………………………………………………………………….15材料與方法………………………………………………………….16結(jié)果………………………………………………………………….25附圖………………………………………………………………….28討論………………………………………………………………….35結(jié)論………………………………………………………………….36參考文獻(xiàn)…………………………………………………………….37綜述放療促進(jìn)以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治
4、療的研究進(jìn)展…………40致謝……………………………………………………………………….48個人簡歷………………………………………………………………….49中文摘要X-射線通過誘導(dǎo)TNF-α的產(chǎn)生促進(jìn)DC疫苗的抗腫瘤作用摘要目的：腫瘤DC疫苗是腫瘤免疫治療中很有前景的方法之一，但隨著對腫瘤DC疫苗研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)由于受到腫瘤微環(huán)境的影響，單純使用腫瘤DC疫苗難以獲得滿意的結(jié)果。高能X-射線在殺死腫瘤細(xì)胞的同時，還可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生HMGB-1及HSP70等內(nèi)源性因子，增加腫瘤細(xì)胞的免疫原性。因此，X-射線照射可促進(jìn)腫瘤DC疫苗的抗瘤能力。
5、但對X-射線與DC疫苗的聯(lián)合的方式以及二者聯(lián)合抗腫瘤的機制的研究還有待進(jìn)行深入研究。本研究以荷瘤小鼠為模型，首先觀察了X-射線照射后，腫瘤DC疫苗注射的時間窗對二者聯(lián)合抗腫瘤的影響，同時對聯(lián)合抗瘤的機制進(jìn)行了較系統(tǒng)的分析。方法：1DC疫苗制備、活性及其抗原呈遞能力檢測處死BALB/c小鼠，取小鼠股骨的骨髓細(xì)胞，用含有GM-CSF（10ng/ml）和IL-4（10ng/ml）的完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞分化，在培6養(yǎng)的第5天，重新收集細(xì)胞計數(shù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)至1×10/ml，重新加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，加入X射線處理的4T1腫瘤細(xì)胞裂解液（終濃度50μ
6、g/ml），在37℃含飽和水氣、5%的CO2培養(yǎng)箱中孵育16小時，然后再用LPS（100ng/ml）和IFN-Υ（10ng/ml）刺激36h進(jìn)一步誘導(dǎo)DCs的成熟，以此作為DC疫苗。用終濃度25μg/ml的絲裂霉素C處理的DC細(xì)胞做為刺激細(xì)胞，反應(yīng)細(xì)胞是雌性C57BL/6小鼠的脾細(xì)胞。將反應(yīng)細(xì)胞和刺激細(xì)胞分別以200：1、100:1、50:1的比例加入到96孔U型板中孵育96小時，孵育完成之前的4h每孔加入20μlCellTiter96?AQueousOneSolutionReagent。用MTS比色法來檢測反應(yīng)細(xì)胞增殖情況。收集抗原負(fù)載的、
7、LPS和IFN-Υ誘導(dǎo)成熟的DCs的培養(yǎng)上清，檢測IL-12p70的水平，以了解DC分泌IL-12的情況。同時收集抗原負(fù)載的、LPS和IFN-Υ誘導(dǎo)成熟的DCs，流式細(xì)胞儀檢1中文摘要測CD11c、MHCII、CD86和ICAM-1的表達(dá)。2X-射線對荷瘤小鼠腫瘤組織及腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的動態(tài)分析2.1X-射線處理荷瘤小鼠將4T1細(xì)胞移植BALB/c小鼠右側(cè)第五對乳腺脂肪墊下，在腫瘤細(xì)胞移植的第七天將荷瘤小鼠隨機分為3組（8只/組）。未處理組、10Gy×3照射組（10Gy劑量照射，每日一次，連續(xù)3天）、30Gy照射組。2.2Real
8、-timePCR動態(tài)分析腫瘤組織及腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞IL-6、IL-10mRNA的表達(dá)在X-射線照射腫瘤塊后的第2、11和21天，分別處死荷瘤小鼠，分離腫瘤組織，分別
