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《dc2fdribble肝癌疫苗的制備與其抗腫瘤作用的初步的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、東南大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謂}的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得東南大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謂}意。研究生簽名：劣岔寺同期：沙卜毛彳東南大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明東南大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)
2、制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。除在保密期內(nèi)的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布(包括刊登)論文的全部或部分內(nèi)容。論文的公布(包括刊登)授權(quán)東南大學(xué)研究生院辦理。研究生虢駕鉑導(dǎo)師躲基主百f．，J同朔：伽I口7l，7名中義摘要中文摘要研究生：蘇舒導(dǎo)師：王立新相關(guān)背景及研究目的：肝癌是惡性程度極高、預(yù)后極差的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類的健康。治愈性切除手術(shù)或肝移植是目前肝癌病人首選的治療方法，但由于肝癌的肝內(nèi)多發(fā)病灶、肝外轉(zhuǎn)移及供體缺乏等因素，新診斷出的肝癌病人只有10％～15％可采
3、取手術(shù)治療。臨床資料顯示，大部分肝癌病人對(duì)化療、放療等治療不敏感，因此，肝癌的臨床治療迫切需要新的方法和手段。腫瘤生物治療作為一種新的肝癌治療策略，具有特異性強(qiáng)、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，越來越受到人們重視。其中，以樹突狀細(xì)胞(Dentriticcells，DC)為載體的肝癌疫苗目前已成為肝癌生物治療的研究熱點(diǎn)。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤抗原不能有效呈遞給T細(xì)胞是導(dǎo)致免疫逃逸的重要原因。同時(shí)在荷瘤機(jī)體中，由于存在抗原遞呈細(xì)胞的功能低下甚至缺陷，特別是DC在數(shù)量和功能的改變，可造成腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，導(dǎo)致腫瘤的形成
4、和發(fā)展。目前，基于DC的腫瘤疫苗被認(rèn)為是最有效的腫瘤疫苗之一，已丌展大量基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)。DC疫苗功能的實(shí)現(xiàn)主要取決于兩部分因素，～是DC的有效抗原提呈作用；二是負(fù)載有效的抗原，使抗原信息得以充分表達(dá)。然而，研究試驗(yàn)中存在許多問題，包括DC來源、制備過程、DC的抗原負(fù)載、用量、使用頻度、免疫途徑和次數(shù)等，因此如何解決上述問題已成為DC研究的熱點(diǎn)。專職抗原提呈細(xì)胞(profesionalantigenpresentingcell，pAPC)交叉遞呈的抗原多肽是誘導(dǎo)特異性效應(yīng)細(xì)胞的物質(zhì)基礎(chǔ)，而腫瘤細(xì)胞直接遞呈的抗原
5、多肽是效應(yīng)細(xì)胞有效識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞的靶點(diǎn)。一方面，腫瘤細(xì)胞直接遞呈的抗原多肽主要來源于腫瘤細(xì)胞的“短壽蛋白”(平均半衰期約為10分鐘，經(jīng)蛋白酶體途徑降解)；另一方面，pAPC交叉遞呈的抗原多肽主要來源于腫瘤細(xì)胞的“長壽蛋白”(平均半衰期約為3000分鐘，經(jīng)白噬途徑降解)，兩者問可能存在著不對(duì)稱現(xiàn)象，因此，解決上述的不對(duì)稱性是腫瘤免疫需要解決的課題。如何充分利用腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的全部抗原信息，誘導(dǎo)能更有效識(shí)別腫瘤細(xì)胞的特異性效應(yīng)細(xì)胞是目前以“長壽蛋白”為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗所面臨的難題。東南人學(xué)碩I：學(xué)位論文本研究結(jié)合前期
6、的工作基礎(chǔ)，以Balb／c小鼠來源的肝癌細(xì)胞株一H22為靶細(xì)胞，采用蛋白酶體抑制劑阻斷腫瘤短壽蛋白的降解，促使其進(jìn)入自噬途徑，達(dá)到募集短壽蛋白的目的，同時(shí)采用白噬誘導(dǎo)劑促進(jìn)白噬小體形成，并采用NH4C1抑制溶酶體功能，阻JlJ溶酶體對(duì)自噬小體中蛋白的降解。在此基礎(chǔ)上摹集富含腫瘤“信息”的抗原載體：富含短壽蛋白的自噬小體(Dripsinblebs，簡稱DRibble)，在前期研究中證實(shí)其比腫瘤細(xì)胞裂解液以及可溶性蛋白抗原具有更好的抗原性，能有效激發(fā)抗腫瘤應(yīng)答。本研究通過對(duì)DRibble制備及其生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究
7、，并通過靜脈聯(lián)合輸注GM．CSF以及Flt3L表達(dá)質(zhì)粒的方法誘導(dǎo)小鼠DC的擴(kuò)增，檢測其亞型及其功能。通過制備DC／DRibble疫苗，研究其在小鼠H22皮下移植瘤中的抗腫瘤作用，為肝癌尋找新的的腫瘤生物治療方法奠定一定的理論以及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：1．采用尾靜脈注射法聯(lián)合輸注Flt3L和GM．CSF表達(dá)質(zhì)粒，15天后收獲小鼠脾臟，計(jì)算小鼠脾細(xì)胞數(shù)量；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測脾細(xì)胞CDllc、CDllb、CD8、B220等細(xì)胞表型分子以鑒定體內(nèi)誘導(dǎo)DC的比例及亞型；2．采用納米鐵以及CFSE標(biāo)記的DRibble作為吞噬物，檢
8、測DC對(duì)上述物質(zhì)的吞噬功能；3．收獲HBsAg免疫小鼠的淋巴細(xì)胞，體外以DC負(fù)載HBsAg和單獨(dú)的HBsAg分別刺激并收集培養(yǎng)上清，ELISA法檢測其IFN吖水平；4．采用蛋白酶體降解途徑阻斷劑、自噬促進(jìn)劑、溶酶體酸化抑制劑等藥物處理H22細(xì)胞，采用分步高速離心法摹集H22細(xì)胞的DRibbles；采用Westernblot法檢測DRibble以及裂解液中自噬小體特征性標(biāo)志
