x-射線通過誘導(dǎo)tnf-α的產(chǎn)生促進(jìn)dc疫苗的抗腫瘤作用-免疫學(xué)專業(yè)論文

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1、優(yōu)秀畢業(yè)論文河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。，研究生簽名：王卅卟導(dǎo)師簽章：喙奔?xì)g二級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：勃∥年Z月多日河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作

2、及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：z嘛導(dǎo)師簽章：痞布佘厚沙貯年石月；El精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文萬(wàn)方數(shù)據(jù)精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文JIlllllIlllIIIIIIllllllllllIIIIf目錄Y2784961中文摘要．．1英文摘要．．6英文縮寫．．14研究論文x．射線通過誘導(dǎo)TNF一0【的產(chǎn)生促進(jìn)DC疫苗的抗腫瘤作用—1L—．、一日U舌．15材料與方法．16結(jié)果．25附

3、圖．28討{侖．35結(jié)論．36參考文獻(xiàn)．37綜述放療促進(jìn)以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療的研究進(jìn)展40致謝．48個(gè)人簡(jiǎn)歷．49精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文萬(wàn)方數(shù)據(jù)精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文中文摘要X．射線通過誘導(dǎo)TNF．a(chǎn)的產(chǎn)生促進(jìn)DC疫苗的抗腫瘤作用摘要目的：腫瘤DC疫苗是腫瘤免疫治療中很有前景的方法之一，但隨著對(duì)腫瘤DC疫苗研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)由于受到腫瘤微環(huán)境的影響，單純使用腫瘤DC疫苗難以獲得滿意的結(jié)果。高能x一射線在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，還可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生HMGB．1及HSP70等內(nèi)源性因子，增加

4、腫瘤細(xì)胞的免疫原性。因此，X一射線照射可促進(jìn)腫瘤DC疫苗的抗瘤能力。但對(duì)X．射線與DC疫苗的聯(lián)合的方式以及二者聯(lián)合抗腫瘤的機(jī)制的研究還有待進(jìn)行深入研究。本研究以荷瘤小鼠為模型，首先觀察了X-射線照射后，腫瘤DC疫苗注射的時(shí)間窗對(duì)二者聯(lián)合抗腫瘤的影響，同時(shí)對(duì)聯(lián)合抗瘤的機(jī)制進(jìn)行了較系統(tǒng)的分析。方法：1DC疫苗制備、活性及其抗原呈遞能力檢測(cè)處死BALB／c小鼠，取小鼠股骨的骨髓細(xì)胞，用含有GM．CSF(10ng／m1)和IL一4(10ng／mt)的完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞分化，在培養(yǎng)的第5天，重新收集細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)

5、細(xì)胞數(shù)至1×106／ml，重新加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，加入x射線處理的4T1腫瘤細(xì)胞裂解液(終濃度50}tg／m1)，在37。C含飽和水氣、5％的C02培養(yǎng)箱中孵育16小時(shí)，然后再用LPS(100ng／m1)和IFN—Y(10ng／m1)刺激36h進(jìn)一步誘導(dǎo)DCs的成熟，以此作為DC疫苗。用終濃度251ag／ml的絲裂霉素C處理的DC細(xì)胞做為刺激細(xì)胞，反應(yīng)細(xì)胞是雌性C57BL／6／J、鼠的脾細(xì)胞。將反應(yīng)細(xì)胞和刺激細(xì)胞分別以200：l、100：1、50：1的比例加入蟄J96；f[．U型板中孵育96／J',時(shí)，孵育

6、完成之前的4h每孔加入20¨1CellTiter96⑩AQueousOneSolutionReagent。用MTS比色法來(lái)檢測(cè)反應(yīng)細(xì)胞增殖情況。收集抗原負(fù)載的、LPS和IFN．Y誘導(dǎo)成熟的DCs的培養(yǎng)上清，檢、狽,JjIL．12p70的水平，以了解DC分泌IL．12的情況。同時(shí)收集抗原負(fù)載的、LPS和IFN．Y誘導(dǎo)成熟的DCs，流式細(xì)胞儀檢精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文萬(wàn)方數(shù)據(jù)精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文中文摘要測(cè)CDllC、MHCII、CD86和ICAM．1的表達(dá)。2X一射線對(duì)荷瘤小鼠腫瘤組織及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)

7、胞細(xì)胞因子表達(dá)的動(dòng)態(tài)分析2．1x一射線處理荷瘤小鼠將4Tl細(xì)胞移植BALB／c小鼠右側(cè)第五對(duì)乳腺脂肪墊下，在腫瘤細(xì)胞移植的第七天將荷瘤小鼠隨機(jī)分為3組(8只／組)。未處理組、10Gyx3照射組(10Gy齊mj量照射，每日一次，連續(xù)3天)、30Gy照射組。2．2Real．timePCR動(dòng)態(tài)分析腫瘤組織及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞IL．6、IL一10mRNA的表達(dá)在X一射線照射腫瘤塊后的第2、11并[121天，分別處死荷瘤小鼠，分離腫瘤組織，分別提取腫瘤組織和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的總RNA，經(jīng)常規(guī)反轉(zhuǎn)錄后，用IL．6、IL．1

8、0特異性引物擴(kuò)增。2．3ELISA分析TGF．B及TNF．0L的水平在x．射線照射腫瘤塊后的第2、11和21天，分別處死荷瘤小鼠，分離腫瘤組織，PBS洗去血污，用含有蛋白酶抑制劑的500_ldPBS進(jìn)行勻漿，12000r／rain，4。C離心15min，取上清，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行細(xì)胞因子測(cè)定。3觀察x射線聯(lián)合DC疫苗對(duì)荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)情況將4T1細(xì)胞經(jīng)腹部右側(cè)第五對(duì)乳腺脂肪墊移植給BALB／cdx鼠