第二章 紅細(xì)胞檢查

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1、第二章紅細(xì)胞檢查一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)1、檢測(cè)原理：①手工顯微鏡法：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中紅細(xì)胞數(shù)量。②血液分析儀法：用電阻抗和(或)光散射原理。2、參考值：成年男性(4-5.5)×1012/L；成年女性(3.5-5.0)×1012/L；新生兒(6.0-7.0)×1012/L。3、醫(yī)學(xué)決定水平：高于6.8×1012/L，應(yīng)采取治療措施；低于參考值低限，為診斷貧血界限，應(yīng)尋找病因；低于1.5×1012/L應(yīng)考慮輸血。4、臨床意義：⑴生理性變化：①年齡與性別的差異：新生兒由于出

2、生前處于生理性缺氧狀態(tài)，故紅細(xì)胞明顯增高；②精神因素：可使腎上腺素增多，導(dǎo)致紅細(xì)胞暫時(shí)增多；③劇烈體力運(yùn)動(dòng)和勞動(dòng)：由于需氧量增加，是紅細(xì)胞生成素增加，骨髓加速釋放紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞增多；④氣壓減低：高山地區(qū)居民和登山運(yùn)動(dòng)員因缺氧，紅細(xì)胞代償性增生，數(shù)量增高；⑤妊娠中后期：孕婦血漿容量明顯增加使血液稀釋，導(dǎo)致紅細(xì)胞減少。⑵紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少，見(jiàn)于臨床上各種原因的貧血。按病因?qū)⒇氀殖散偌?、慢性紅細(xì)胞丟失過(guò)多：各種原因出血；②紅細(xì)胞壽命縮短：各種原因溶血；③造血原料不足④骨髓造血功能減退。⑶紅細(xì)胞增多①絕對(duì)紅細(xì)胞增多：a原發(fā)性紅細(xì)胞增多，如真性紅

3、細(xì)胞增多癥，良性家族性紅細(xì)胞增多癥等；b繼發(fā)性紅細(xì)胞增多，如房室間隔缺損、法洛四聯(lián)癥等各種先天性心血管疾病，各種引起肺氣體交換面積減少的疾病，異常血紅蛋白病，腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)(庫(kù)欣病)等；②相對(duì)性紅細(xì)胞增多：如嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、多汗、多尿、大面積燒傷、晚期消化道腫瘤長(zhǎng)期不能進(jìn)食等。5、操作方法：①改良牛鮑計(jì)數(shù)板(血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一條支持柱，將專用蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池內(nèi)劃有長(zhǎng)、寬各3.0mm的方格，分成9個(gè)大格，每個(gè)大格面積為1.0mm2，容積為0.1mm3(μl)

4、。中央大方格用雙線分成25個(gè)中方格，位于正中及四角的5個(gè)中方格是紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)區(qū)域，每個(gè)中方格用單線分為16個(gè)小方格。四角的4個(gè)大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個(gè)中方格。②蓋玻片：規(guī)格24mm×20mm×0.6mm。③計(jì)數(shù)操作：a準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板；b加稀釋液2ml；c加血：10μl；d充池；e靜置3-5min；f計(jì)數(shù)：先用低倍鏡觀察血細(xì)胞分布是否均勻，否則要重新充池，然后用高倍鏡計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)；g計(jì)算：紅細(xì)胞/L=N5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)×25/5將5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)換算成1個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)×10將1個(gè)

5、大方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)換算成1μl血液中的紅細(xì)胞數(shù)(一個(gè)大方格的容積為0.1μl)×1061L=106μl×200稀釋倍數(shù)(本來(lái)為201倍，改為200是為了便于計(jì)算)=N×1012=N/100×10126、注意事項(xiàng)：①保證計(jì)數(shù)板跟蓋玻片清潔，使用后依次用95%乙醇、蒸餾水棉球、清潔綢布擦凈②一次完成充池③改良牛鮑計(jì)數(shù)板每年要鑒定1次④計(jì)數(shù)池中若分布不均，每個(gè)中方格間相差超過(guò)20個(gè)應(yīng)重新充池，兩次紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相差不得超過(guò)5%⑤對(duì)壓線細(xì)胞采用數(shù)左不數(shù)右、數(shù)上不數(shù)下的原則⑥白細(xì)胞過(guò)高者(WBC≥100×109/L)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行校正，方法有兩種：一是

6、，直接將患者紅細(xì)胞數(shù)減去白細(xì)胞數(shù)；二是，在高倍鏡下勿將白細(xì)胞計(jì)入⑦紅細(xì)胞稀釋液有：Hayem液缺點(diǎn)：遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質(zhì)沉淀而使紅細(xì)胞易凝集。由NaCl(調(diào)節(jié)滲透壓)、Na2SO4(提高比密防止細(xì)胞粘連)、HgCl2(防腐)和蒸餾水組成；枸櫞酸鈉稀釋液由枸櫞酸鈉(抗凝和維持滲透壓)、甲醛(防腐和固定紅細(xì)胞)、氯化鈉(調(diào)節(jié)滲透壓)和蒸餾水組成；普通生理鹽水或加1%甲醛生理鹽水。二、血紅蛋白測(cè)定1、檢查原理：血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括：氧和血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白(Hi)或其他衍生物。采用比色法測(cè)定，包括：氰化高鐵血紅蛋

7、白(HiCN)測(cè)定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白(SDS)測(cè)定法、疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法、堿羥血紅蛋白法、溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血紅蛋白測(cè)定法、沙利(Sahli)酸化血紅蛋白法等。①HiCN測(cè)定原理：血液中除硫化血紅蛋白(SHb)外的各種Hb均可被高鐵氯化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CN-結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物－－氯化高鐵血紅蛋白，其在540nm處有一吸收峰，通過(guò)分光光度計(jì)可計(jì)數(shù)求出每升血液中的血紅蛋白濃度②SDS測(cè)定法原理：除SHb外的各種Hb均可于低濃度SDS作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物，其吸收峰在538nm，通過(guò)風(fēng)光光度

8、計(jì)測(cè)定波峰吸光度經(jīng)計(jì)算就可求出每升血液中的血紅蛋白濃度。2、參考值：成年男性：120－160g/L；成年女性110－150g/L；新生兒