hcv核心抗原檢測(elisa法)

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1、1.檢驗?zāi)康呐c原理1.1檢驗?zāi)康囊?guī)范丙型肝炎病毒核心抗原檢測試驗，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性?？捎糜谂R床輔助診斷是否感染丙型肝炎病毒。1.2檢驗原理應(yīng)用ELISA法原理檢測人血清或血漿中的丙型肝炎病毒游離核心抗原，用2株丙型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體包被酶標(biāo)板，另2株丙型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體標(biāo)記辣根過氧化物酶，加入TMB顯色液后顯色，用來檢測血清或血漿中的丙型肝炎病毒游離核心抗原。1.3分析參數(shù)樣品量100μL試劑量100μL方法ELISA反應(yīng)時間90分鐘反應(yīng)溫度37℃2.樣本收集和貯存2.1原始樣本系統(tǒng)血清（包括SST管）和血漿

2、（EDTA-K2、肝素鋰、肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1、CP2D、CPD、草酸鉀），尿液（晨尿、隨時尿、24小時尿等）或其它體液（羊水等）使用玻璃管或塑料管分離樣本，無黃疸、無溶血、無脂血，已分離出的樣本應(yīng)立即分析。2.2試管及填充物類型血清樣本需用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管，收集3ml血液。待血液凝固后3500rpm離心5分鐘，分離血清。2.3保存條件及時間2.3.1接收標(biāo)本后在置1-2h后將標(biāo)本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心必須達到3000rpm15min，離心后的血清中不能含有顆粒物和微量纖維蛋白。2.3.2標(biāo)本保存時

3、間：室溫（15-25℃）下可穩(wěn)定48h，普通冰箱中（2-8℃）穩(wěn)定5d，在-20℃最多可保存4周。避免反復(fù)凍融。不可使用熱滅活的標(biāo)本。2.3.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置4-8℃冰箱內(nèi)保存7d。3.試劑3.1試劑成分丙型肝炎病毒核心抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法），湖南康潤藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字3401179。試劑盒組分：1.抗HCV-cAg單克隆抗體包被酶標(biāo)板；2.抗HCV-cAg酶標(biāo)記抗體工作液；3.HCV-cAg陽性對照；4.HCV-cAg陰性對照；5.濃縮洗滌液；6.TMB顯色液A；7.TMB顯色液B；8.終止液；9.附件：自

4、封袋、封板模和產(chǎn)品說明書。3.2試劑準(zhǔn)備試驗前提前將所需的試劑盒從貯藏冰箱領(lǐng)出，室溫平衡30分鐘。3.3試劑貯藏要求（StorageInstruction）未打開的試劑盒保存于2-8℃，效期12個月。不可凍存。4.儀器TECAN酶免工作站。5.校準(zhǔn)見TECAN酶免工作站SOP。6.操作步驟6.1配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。6.2加樣：將微孔條固定于支架，按序編號。每次檢測均需設(shè)置陰性對照、陽性對照和空白對照各2孔。空白對照孔直接加入樣品稀釋液200微升，其余每孔加樣品稀釋液100微升，分別在相應(yīng)孔加入待測樣品、陰性對照和陽

5、性對照各100ul。6.3溫育：充分混勻，封板，置37°C孵育60分鐘。6.4洗板：小心揭掉封板模，用洗滌液洗滌5遍，最后一次盡量扣干。6.5加酶：每孔加入酶結(jié)合物200ul。6.7溫育：充分混勻，加上封板膜，置37℃溫育30分鐘。6.8洗滌：小心揭掉封板模，用洗滌液洗滌5遍，最后一次盡量扣干。6.9顯色：每孔加入顯色劑A、B各50ml，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。6.10測定：每孔加終止液50ml，輕輕振蕩混勻，用酶標(biāo)儀讀值，在雙波長450nm/630nm（單波長檢測以空白對照調(diào)零）下讀取各孔A值。7.質(zhì)量控制無8.檢驗結(jié)果報告

6、8.1?結(jié)果計算?CUT?OFF值=陰性對照孔A值+0.06。（陰性對照A值大于0.1和陽性對照A值小于0.6時應(yīng)重新試驗，陰性對照A值≤0.06時以0.06計算。）待測樣品A值＜CUT?OFF值時，判為陰性。?待測樣品A值≥CUT?OFF值時，判為陽性。8.2結(jié)果審核由資深專業(yè)人員負責(zé)檢驗結(jié)果的審核。確認反應(yīng)板結(jié)果的有效性及室內(nèi)質(zhì)控在控。確認反應(yīng)板反應(yīng)外觀與判讀的結(jié)果一致，核對判斷的陰陽性結(jié)果個數(shù)。審核者認真審核每一個測定結(jié)果，對發(fā)出報告結(jié)果的可靠性負責(zé)，并在報告單的審核者處簽字。審核與其他標(biāo)志物等的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，

7、應(yīng)分析與查找原因。對弱陽性標(biāo)本再重復(fù)試驗確定它的結(jié)果。如果重復(fù)檢測都是弱陽性結(jié)果的標(biāo)本建議對其進行跟蹤檢測。8.3報告?zhèn)鬏敿按蛴〗Y(jié)果經(jīng)審核后，確認準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報告。報告單上標(biāo)明結(jié)果的參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的信息。如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。8.4測量不確定度的評定方法見《免疫激素測量不確定度的評估報告》。9．參考范圍陰性，提示沒有檢測到丙型肝炎病毒核心抗原。10.可報告區(qū)間陰性～陽性。11.危急值報告不適用。12.方法的局限性12.1本試劑僅用于定性檢測人血清或血漿樣品中

8、的HCV游離核心抗原。12.2由于ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑檢測結(jié)果陰性并不排除HCV感染的可能，檢測結(jié)果陽性必須結(jié)合確診試劑或其他指標(biāo)和臨床信息進行分析。13．臨床意義H