金標(biāo)法和elisa法檢測hcv結(jié)果分析

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1、金標(biāo)法和ELISA法檢測HCV結(jié)果分析張同華（鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院河南鄭州450053）【摘要】目的探討金標(biāo)法和ELISA法檢測HCV結(jié)果的差異及影響因素。方法收集木院2012年輸血前HCV抗體篩檢的866例對象，所有待檢血清均采用酶聯(lián)ELISA法和金標(biāo)法進(jìn)行初篩檢測，并對結(jié)果進(jìn)行比對。結(jié)果金標(biāo)法干擾因素多，假陽性率高；ELISA法敏感性和特異性都較理想，干擾因素少。結(jié)論HCV初篩檢測是保證結(jié)果準(zhǔn)確的首要關(guān)鍵，應(yīng)結(jié)合臨床情況兩種方法進(jìn)行互補(bǔ)性應(yīng)用?！娟P(guān)鍵詞】金標(biāo)法ELISA法HCV結(jié)果分析【中圖分類號】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】2095-1752（2013）20-0

2、156-01丙肝主要通過輸血引起，目前，實(shí)驗(yàn)室檢測HCV的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）法和金標(biāo)法，如何快速的篩選出丙肝病毒攜帶者，是預(yù)防和控制丙型肝炎感染和擴(kuò)散的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA法是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶高效催化底物的敏感性結(jié)合的一種新型試劑分析法⑴，為探討HCV快速診斷試劑膠體金法（膠體金免疫層析實(shí)驗(yàn)）與酶聯(lián)免疫法的結(jié)果差異,現(xiàn)實(shí)驗(yàn)報告如下。臨床資料與方法對2012年我院入院中請輸血的866例對象進(jìn)行輸血前HCV初篩檢測，其中男560例，女306例，年齡為23—78歲，患者均在輸血前抽取3—5ml靜脈血，共計866例血樣。所有血清標(biāo)木都采

3、用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和金標(biāo)法⑵兩種方法進(jìn)行初篩檢測，并采用衛(wèi)牛部血站系統(tǒng)免疫質(zhì)控血清作為對照。兩種方法均嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，對于初篩陽性的標(biāo)木，同時使用兩種方法進(jìn)行平行復(fù)查。結(jié)果實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，兩種檢測方法對質(zhì)控血清的檢測結(jié)果均很理想，敏感性和特異性均為100%,對866例患者血清樣本進(jìn)行了酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)初篩得到陽性例數(shù)4例，使用金標(biāo)法得到陽性例數(shù)6例，對于ELISA法檢測陽性的樣本使用金標(biāo)法測試均呈陽性，而使用金標(biāo)法檢測到6例陽性標(biāo)本經(jīng)ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)有2例陰性。討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果及臨床實(shí)際操作中，金標(biāo)法檢測快速方便，試劑保存時間長,特別適用于急癥患者及小型實(shí)驗(yàn)室HCV初篩檢

4、測。ELISA法敏感性和特異性都較理想，干擾因素少，但是操作耗吋長，耗費(fèi)犬，試劑開封后，如果保存不當(dāng)，造成試劑失效，或者敏感性下降，會影響其以后檢測標(biāo)本的準(zhǔn)確性，因此ELISA法不太適用于急癥患者和標(biāo)本量較少的單位。為了達(dá)到較準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，金標(biāo)法檢測時應(yīng)嚴(yán)格按照說明書操作，掌握最適判讀時間，一般為15-20分鐘，吋間過短，會造成假陰性，吋間過長，會造成假陽性。金標(biāo)法靈敏度較低，大于lng/ml才能檢出。如果加樣太多，層析太快，抗原抗體還沒有來得及反應(yīng)，就越過了檢測線，會造成假陰性。血清要充分析出，不使用溶血或含有紅細(xì)胞的標(biāo)本，以免在檢測區(qū)出現(xiàn)一條顏色很淺的非特異性層析線，由

5、于金標(biāo)法是目視判讀結(jié)果，常會誤診為假陽性。ELISA法操作時，標(biāo)本要新鱗，一般不要用肝素和EDTA抗凝的標(biāo)本，因?yàn)楦嗡乜鼓獫{會增加0D值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷，能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān)；EDTA可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性，造成假陰性。采血量不能太少，最好將血液標(biāo)本采集后放進(jìn)水浴箱，使標(biāo)本充分凝固后，再用3000rpm,離心15分鐘后再分離血清，如果在血液還未開始凝固吋即強(qiáng)行分離血清，此吋的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；離心轉(zhuǎn)速過低或離心吋間過短，由于血液離心不充分均可導(dǎo)致假陽性。

6、不要使用溶血或者血清渾濁的標(biāo)本，因紅細(xì)胞破壞釋放大量血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素［3］具有弱過氧化物酶的活性，其作用效應(yīng)與辣根過氧化物酶類似，會使結(jié)果產(chǎn)生假陽性；血清渾濁的標(biāo)本，一定要離心后再加樣，以免紅細(xì)胞加入，造成假陽性，溶血標(biāo)本最好重新采集樣本，重新檢測。進(jìn)行HCV檢測吋，為了避免過多的產(chǎn)生假陰性或者假陽性結(jié)果，要使用具有國藥準(zhǔn)字的試劑，不使用過期試劑，在正確處理標(biāo)本的基礎(chǔ)上，要嚴(yán)格操作規(guī)程，確保最適的實(shí)驗(yàn)條件，原則上應(yīng)該采用ELISA法進(jìn)行初檢，則用金標(biāo)法復(fù)檢。如遇急需檢測結(jié)果，或者無法重新采取血樣，可直接用金標(biāo)法檢測，但應(yīng)注明檢測方法，便于不同醫(yī)院的結(jié)果比對。如

7、遇常規(guī)標(biāo)本，則必須用ELISA法檢測后，方可報告結(jié)果。參考文獻(xiàn)⑴葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，編?全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程?第三版?南京：東南大學(xué)出版社，2006：572.⑵葉應(yīng)嫵，王毓三，中子瑜，編?全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程?第三版?南京：東南大學(xué)岀版社，2006：562.[3]許文榮，王建中，編.臨床血液學(xué)與檢驗(yàn)[M]?第四版?北京：人民衛(wèi)生出版社，2007:143.