病理學(xué)論文：胃印戒細(xì)胞癌的細(xì)胞起源及其癌前病變的病理學(xué)

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1、病理學(xué)論文：胃印戒細(xì)胞癌的細(xì)胞起源及其癌前病變的病理學(xué)摘要目的:研究胃印戒細(xì)胞癌的發(fā)生與胃腺增殖區(qū)的關(guān)系,探討其細(xì)胞起源和癌前病變.方法:以42例早期胃印戒細(xì)胞癌為研究對(duì)象,觀測(cè)其組織形態(tài),采用免疫組織化學(xué)雙染標(biāo)記癌灶內(nèi)分化標(biāo)志物MUC5AC和MUC6的表達(dá)情況,檢測(cè)癌灶不同區(qū)域Ki-67以及胃腸道干/祖細(xì)胞標(biāo)志物musashi-1的表達(dá)差異,并與癌旁胃腺進(jìn)行對(duì)比.結(jié)果:早期胃印戒細(xì)胞癌具有特征性的分層結(jié)構(gòu).該結(jié)構(gòu)分為兩層,淺表層為典型的印戒細(xì)胞,體積大,胞質(zhì)豐富,基底層為原始的癌細(xì)胞,體積小,核/漿比大;在形態(tài)和解剖定位上,基底層癌細(xì)胞與癌旁胃腺增殖區(qū)細(xì)胞類似,免疫組織化

2、學(xué)顯示其MUC5AC、MUC6表達(dá)均為陰性,或僅微弱表達(dá)MUC5AC,而Ki-67、musashi-1表達(dá)率顯著高于淺表層印戒細(xì)胞(t=31.0和22.8,P<0.01);基底層癌細(xì)胞可向淺表層印戒細(xì)胞分化過渡,這與增殖區(qū)細(xì)胞向胃小凹上皮分化的過程相似;癌旁可見胃腺增殖區(qū)細(xì)胞異型增生,其表型與分層結(jié)構(gòu)基底層癌細(xì)胞一致.結(jié)論:胃印戒細(xì)胞癌可能起源于增殖區(qū)MUC5AC-/lowMUC6-的胃小凹前體細(xì)胞,同時(shí)增殖區(qū)的異型增生是此類胃癌的癌前病變.關(guān)鍵詞:胃腫瘤;印戒細(xì)胞癌;腫瘤發(fā)生;免疫組織化學(xué)0引言基于臨床病理特征的不同,胃癌可分為腸型和彌漫型兩類[1].近年的流行病學(xué)調(diào)查顯

3、示,胃癌的總體發(fā)病率已明顯下降[2],但彌漫型胃癌尤其是印戒細(xì)胞癌的發(fā)病率卻顯著升高[3],因此這類胃癌也受到越來越多的關(guān)注.迄今,胃印戒細(xì)胞癌的早期診斷率不高,一個(gè)重要原因是對(duì)此類胃癌的病理形成機(jī)制和癌前病變尚不清楚.胃印戒細(xì)胞癌與腸型胃癌相似,起源于胃黏膜上皮.組織學(xué)上,胃黏膜的基本結(jié)構(gòu)單位是胃單元(gastricunits),該結(jié)構(gòu)為單克隆起源[4],由胃小凹和胃腺組成,其中胃腺又依次分為峽部、腺頸和基底部.胃腺的峽部以及腺頸上部的細(xì)胞增殖活躍,被稱為增殖區(qū).研究證實(shí),增殖區(qū)是胃印戒細(xì)胞癌起源的部位[5].然而,這一區(qū)域?qū)嶋H上含有多種低分化細(xì)胞,并具有不同分化方向[6

4、,7],印戒細(xì)胞癌究竟起源于增殖區(qū)的何種細(xì)胞,目前尚不清楚.為探討這一問題,本研究以早期胃印戒細(xì)胞癌為觀測(cè)模型,采用免疫組織化學(xué)雙染的方法,觀測(cè)了早期腫瘤細(xì)胞的空間分布、分化表型和增殖特性,希望為認(rèn)識(shí)此類腫瘤的細(xì)胞起源及其癌前病變提供新的病理學(xué)依據(jù).1材料和方法1.1材料回顧我院1988-2008年以及無錫市第三人民醫(yī)院2007-2008年手術(shù)切除的胃癌根治標(biāo)本約2200例,根據(jù)最新WHO國際腫瘤病理分類對(duì)胃印戒細(xì)胞癌的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)(印戒細(xì)胞占癌細(xì)胞總數(shù)的50%以上),以及早期胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)(癌細(xì)胞浸潤深度不超過黏膜下層),共確認(rèn)42例早期印戒細(xì)胞癌標(biāo)本作為研究對(duì)象,患者年

5、齡30-77歲,其中男25例,女17例,均無家族史;腫瘤分期:24例為T1a期,局限于黏膜內(nèi);18例為T1b期,累及黏膜下層.對(duì)所有標(biāo)本的存檔蠟塊連續(xù)切片(厚3μm),蘇木精-伊紅(HE)染色.另取10例正常胃黏膜作為對(duì)照.1.2方法1.2.1免疫組織化學(xué)染色:采用免疫組織化學(xué)雙染標(biāo)記MUC5AC和MUC6陽性細(xì)胞,其中MUC5AC主要表達(dá)于胃小凹、峽部和腺頸部的黏液細(xì)胞[8](抗體購自福州邁新公司,為工作液),MUC6則局限于腺頸的黏液細(xì)胞和基底部的幽門腺上皮[8](濃縮抗體購自上海長島公司,稀釋度1∶50),此二者常被用來作為胃上皮分化的標(biāo)志物.操作按產(chǎn)品說明書進(jìn)行,并

6、根據(jù)文獻(xiàn)略有改變[9],步驟簡述如下:石蠟切片脫蠟至水;檸檬酸緩沖液(pH6.0)95℃修復(fù)10min,保溫10min;3%H2O2室溫孵育后血清封閉10min;而后采用SP法先標(biāo)記MUC6,顯色系統(tǒng)為BCIP/NBT,陽性呈藍(lán)黑色,定位于細(xì)胞質(zhì);隨后再次進(jìn)行抗原修復(fù),目的為暴露MUC5AC抗原,同時(shí)滅活前一次染色時(shí)殘留抗體的免疫活性,抗原修復(fù)方法同前.采用SP法標(biāo)記MUC5AC,顯色系統(tǒng)為HRP/AEC,陽性部位呈紅色,定位于細(xì)胞質(zhì).另取連續(xù)切片單獨(dú)標(biāo)記Ki-67(抗體購自福州邁新公司,為工作液)和musashi-1(SantaCruz公司,濃縮液,稀釋度1∶100),其

7、中musashi-1為一類RNA結(jié)合蛋白,與干細(xì)胞的不對(duì)稱分裂有關(guān)[10],是神經(jīng)干細(xì)胞和胃腸道干/祖細(xì)胞的標(biāo)志物[11-13].染色仍采用SP法,顯色系統(tǒng)為HRP/DAB,陽性部位呈棕黃色,定位于細(xì)胞核.陰性對(duì)照采用PBS替代一抗與切片孵育,其余操作相同.1.2.2不同區(qū)域印戒細(xì)胞平均Ki-67、musashi-1陽性細(xì)胞比例的測(cè)定及比較:免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記Ki-67、musashi-1后,檢測(cè)不同區(qū)域陽性癌細(xì)胞的比率.每例標(biāo)本測(cè)定兩個(gè)區(qū)域:癌灶靠近黏膜表面上皮的淺表部分和浸潤最深的部位.每個(gè)區(qū)域隨機(jī)選取5個(gè)視